仪 器 分 析 实 验 报 告

实 验 名 称： 高效液相色谱分析实验

一、 实验目的

1. 了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序。

2. 了解流动相的制备和样品溶液的制备。

3. 知道仪器的运行程序和进行样品分析。

二、仪器和试剂

仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器

试剂：磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸

三、实验步骤

1. 流动相的准备

流动相只有一组：PH=3的磷酸乙腈溶液，进过脱气，用蠕动泵输送。

2. 开机，色谱柱平衡

当1完成后，开机，待色谱柱平衡。

3. 样品溶液的准备

配置好邻氯苯甲酸溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。

4. 基线的查看

由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。

5. 样品进样分析

用10μL的微量注射器取5μL的邻氯苯甲酸，微量注射器中不能有气泡，将微量注射器的针头插入到注射的孔时，打开微量注射阀，将邻氯苯甲酸注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。

6. 色谱柱的清洗

分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色谱柱。

7. 关机

实验完毕后，关闭仪器和电脑。

四、实验数据及处理

1.LC参数

2.色谱柱参数

3.四元泵状态

A： 0.0％ 流速：1.000ml/min

B： 0.0％ 压力：91bar

C： 0.0％

D： 0.0％

4. 柱温箱温控状态

5. 色谱分析谱图见附页，经过注射5μL的邻氯苯甲酸，得到三组实验色谱图，根据谱图列表数据如下：

色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为：

n = L / H

理论塔板数和色谱参数之间的关系为：

n = 16 ( tR / Wb ) 2 = 5.54 ( tR / Y1/2 ) 2

则取第五组数据计算得：

tR =2.437 min = 146.22s Y1/2 = 2.354(0.1375min / 4 ) = 4.855125 s

n = 5.54 ( tR / Y1/2 ) 2 =5025 (块)

五、实验分析与讨论

见图分析：（色谱图见附页）

图中第一个峰是出现在1.188min的一个小峰，第二个峰是出现在1.420min的一个小峰，第三个峰是出现在1.531min的一个小峰，第四个峰是出现在1.816min的一个小峰, 第五个峰是出现在2.437min的一个大峰，第六个峰是出现在3.196min的一个小峰。

注意事项：

1、 实验过程中要注意仪器在运行中不能进入气体，否则会导致压力不稳定，影响柱效。

2、 色谱柱标明了流体的流动方向，不要改变其流动方向，否则会降低色谱柱的性能。

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