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发布时间:2023-12-29 04:14:59


实验中可能出现的常见问题与解决办法
一.污染
二.污染是指由于微生物的侵染,在组织培养容器中滋生大量菌斑,使组培材料不能正常生长和发育的现象,主要有以下5方面的原因:
三.1.器具灭菌:实验的所有器具都要在121°C消毒25min,若灭菌温度不够或者时间不足,都会导致污染。灭菌时要求冷空气完全排除,否则会达不到指定温度。其次,要做好灭菌登记,杜绝出现人为失误造成的污染。此外,在接种过程中,每用一次都要在火焰上彻底灼烧,特别在接触到污染物时极易引起器具污染。
2.外植体:很多材料在灭菌后其实还是带菌的,不过量比较少,短期应该观察不到被感染的现象。
3.接种操作:首先,接种人员的手,手腕要用酒精棉球好好擦拭。其次,对于放置在外的培养物(灭菌好的培养基)其瓶子外壁上有灰尘与微生物,放入超净台前可以用酒精消毒一下。再者,很容易出现瓶口的污染,所以接种人员的技术要娴熟,干练。
4.环境条件:加强环境的灭菌消毒。若有污染的材料不可以就地清洗,必须高压杀菌后再清洗,否则会导致大量孢子弥漫。此外,要及时打扫卫生,定期蒸熏消毒。保证环境的干净。
5.超净工作台:要定期对初过滤器进行清洗和更换。此外,每次使用前要提前20min打开机器预处理,并对台面进行酒精喷雾消毒。


四.材料死亡
五.实验过程中,很可能出现材料死亡,主要有以下几个方面:
六.1.外植体灭菌过度:一旦材料太小或灭菌时间太长,剂量太大,就会导致材料死亡,所以要严格控制时间。
七.2.污染:大量污染会造成材料死亡。
八.3.培养基配置出现问题:在激素配置或营养成分配置出现问题时,材料易死亡,常常发生在无生长点的材料和愈伤组织中。
九.4.培养环境的恶化:温度过高,透气不好,培养过于密集,久不转移,有害气体的累积都会造成培养材料的死亡。
十.【措施】1.选用较为温和的灭菌剂,降低药物浓度,减少灭菌时间,或选取较为坚强的外植体(eg:生长季节取芽)2】注意个人卫生,严格按照规则进行操作。3认真配置各种母液及培养基,选用盐含量较低的培养基,也可以试着用1/21/4培养基,并调整各激素的用量和配比。也可以适当添加抗生素,活性炭及必要的有机营养。4】改善培养环境,及时转移和分瓶。5】加强组培的过度管理。
十一.玻璃化
十二.是一种植物生理失调症,通常为植物体或叶片出现半透明或水渍状,这种现象称为玻璃化。其主要原因有6点如下:

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