《细胞工程学》试卷（A卷）

考试形式: 闭卷笔试

适用专业： 　 考试时间2小时

一：名词解释（共10小题，每小题2分，共20 分）

1 脱分化：已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分化组织状态的过程。

2.细胞杂交：通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合或细胞杂交。

3.早熟萌发：幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。

4.人工种子：指任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。

5.植板率：能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。

6.有限细胞系：经继代培养后细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在有限的时间内生存，经过运动世代后细胞将逐渐死亡。

7.原代培养：也称初代培养期。从体内取出组织接种到第一次传代阶段，一般持续

1-4周。

8.接触抑制： 当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。

9.克隆化：分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法。

10. 体外转化：细胞在体外培养过程中发生与原代细胞形态、抗原、增殖或其它特性的可遗传的变化。细胞在体外培养过程中由有限世代向无限世代转化的过程。

二:填空（每小空0.5分，共20分）

1．根据植物外植体不同可分为[胚胎培养，器官培养，组织培养，细胞培养，原生质体培养]培养。

2．灭菌方法有【高压蒸气灭菌；干热灭菌；燃烧灭菌；射线灭菌】等方式。

3．防止离体培养中材料变褐的方法：一是在培养基中加入抗氧化剂，如【抗坏血酸（柠檬酸或半胱氨酸）】；加入酚类物质吸附剂，如【多胺类物质】；或加入吸收褐色物质，如活性炭。二是改变培养条件，如【减少光照强度或在黑暗条件下培养】。三是改变培养方法，如【将外植体不断地转移到新鲜培养基】。

4.原生质体培养方法有：液体浅层培养；固体平板培养；【液体－固体双层培养；琼脂糖珠培养】方法。

5．植物细胞大规模悬浮培养体系有【成批培养；连续培养；半连续培养】等几种。

6．根据包被的程度，可将人工种子分为三大类：【裸露的或休眠的繁殖体；人工种皮包被的繁殖体；水凝胶包埋再包被人工种皮的繁殖体】。

7．单倍体植株的二倍化方法【自然加倍；人工诱导加倍（用0.5%秋水仙素溶液处理植株；从愈伤组织再生二倍体植株。】

8．诱变植物发生体细胞变异的方法有[物理诱变；化学诱变；转座子插入。]

9．植株再生及增殖方式有【腋芽增殖；不定芽增殖；体细胞胚增殖；愈伤组织增殖】四种。

10．花药培养最适期是：【花粉有丝分裂刚发生前后或期间（单核期小孢子）】； 适宜于幼胚培养的胚发育时期多为：【球形胚至鱼雷形胚】。

11. 悬浮培养细胞的同步化的方法有【饥饿法；抑制剂法；分选法；低温处理】四种。

12．细胞超低温贮存分-【快速冷冻法；逐步冷冻法（或玻璃化冻存；非玻璃化冻存）】两类。

三: 选择题（每题1分，共10分）

1．控制组培中形态建成的激素模型是（A ）
A. 生长素与细胞分裂素的比例 B. 生长素与赤霉素的比例

C. 生长素与脱落酸的比例 D. 生长素与乙烯的比例
2. 用于细胞悬浮和原生质培养的培养基是（B ）

A. MS B.B5 C. Nitch D.White

3．不属于单倍体植物的特点是（ D）

A．体细胞染色体数减半 B．生长发育弱，体形小、各器官明显减小

C．雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代 D．有优势性状

4. 在影响体细胞胚发生的激素因素中，应用最为广泛的是（ D）

A. IBA B.IAA C.BA D. 2,4-D

5. 幼胚培养的取材关键时期是（ BD）

A．子叶期 B.球形胚至鱼雷形 C.心型胚 D.成熟胚

6.植物茎尖脱毒技术基本原理是（ ）

A．病毒在植物体内的分布具有不均匀性

B. 植物细胞同病毒之间有相互竞争的关系，在茎尖分生组织区植物细胞合成代谢旺盛，细胞分裂活跃，细胞的正常核蛋白的合成占优势，病毒竞争不到营养无法自身繁殖

C.在细胞伸长期间病毒蛋白合成就可以占优势，造成病毒蔓延。

D. A、B和C

7.根据植物细胞生长与产物合成的关系, 培养条件下的植物细胞次生产物积累特性( D )

A．产物合成与细胞生长成正比 B. 产物仅在细胞生长下降时合成

C. 产物合成在细胞生长停止以后 D. A、B和C

8．细胞株的特点是 （ 　B）
　　A．遗传物质没有改变，可以无限传代　　

B．遗传物质发生改变，且有癌变特点，可以无限传代
C．遗传物质没有改变，不可无限传代　　

D．遗传物质发生改变，不可无限传代

9．体细胞变异的分子遗传学基础有：D

A．碱基突变 B．DNA序列的选择性扩增与丢失

C. 转座子活化 D. A、B和C

10．只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 B
A．PEG　　B．灭活的病毒 　C．电刺激 D．离心　　

五 判断题（每题1分，共10分）

1. 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。

2. 控制组培中形态建成的激素模型是生长素与细胞分裂素的比例。

3. 半连续培养：是一种介于成批培养和连续培养之间的培养方式。

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

四: 简答题（每题6分，共30分）

1. 影响体细胞胚发生的因素

（1）培养材料的基因型、生理生态（1分）

（2）培养条件

如激素的调控作用----2,4-D是应用最为广泛的生长素。2,4-D的应用有规律性的变化，首先是在较高浓度下诱导胚性细胞的形成，然后在降低2,4-D的浓度下产生早期胚胎，一般在球形胚形成后，除去生长素有利于体细胞胚的继续发育(3分)。

光照、温度、铵态氮、氨基酸等对胚状体的发育影响较大（2分）

2. 原生质体研究的意义

植物原生质体之所以能成为植物细胞工程的理想研究材料，是因为它具有以下重要特点（1分）：

① 易于从同一种植物材料的组织中获得大量的遗传上同一的游离原生质体，为植物细胞的遗传操作的微生物化奠定了基础（1分）；

② 可以像动物细胞一样，被诱导与其他物种的原生质体融合，从而有效地克服了不同物种细胞之间的有性不亲和障碍，为实现远缘物种间的体细胞杂交，培育新种提供了新的手段（1分）；

③ 它既可以捕获外源DNA，也可以捕获较大的细胞器，如病毒颗粒、叶绿体、线粒体等，因此是植物遗传转化的理想受体（1分）；

④ 保持着植物细胞的全能性，在适宜的培养条件下，可以重新长出细胞壁，进行细胞分裂、分化，形成完整的小植株（1分）；

⑤ 植物原生质体虽然没有细胞壁，但仍然进行着植物细胞的各种生命活动，包括蛋白质和核酸的合成、光合作用、呼吸作用、通过膜向外界进行物质交换等

（1分）。

3．简述人工种皮的基本要求

装配理想的人工种皮应该是：具有一定的封闭性以保证人工胚乳的各种成分不易流失（1分）；

同时又具有良好的透气性（1分）；

具有一定的坚硬度，以加强人工种子的耐储运性和适于机械化操作（1分）；

无毒无害，能保证繁殖体顺利穿透发芽（1分）；

配制简单易行，成本低（1分）。

常用的人工种皮材料（1分），早期使用Elvax 4260涂膜， 新近试验使用的有二氧化硅化合物材料。

4．HAT选择系统

HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T）的选择性培养基（3分）。

正常动物细胞DNA 合成途径有两种，一种是全合成途径，可为A所阻断；另一种是补救途径，该途径的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），可以促进次黄嘌呤和鸟嘌呤与磷酸核糖焦磷酸（PRPP）间的转磷酸核糖基作用，生成磷酸次黄苷（IMP）。由于突变细胞嘌呤核苷酸合成补救通路丧失，它就只能依赖于嘌呤的全程合成途径。一旦DNA全合成途径被培养基中氨基蝶呤（A）抑制时，在有外源性次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）存在的条件下，野生型细胞能利用补救途径而生存，而突变细胞则死亡（3分）。HAT选择培养基就是根据这一原理而设计的。

5．血清在培养液中的主要功能

1）提供对维持细胞指数生长的激素（1分）；

2）提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其它激素等，能结合或调节它们所结合的物质活力（1分）；

3）有些情况下，结合蛋白能与有毒金属和热原结合，起到解毒作用（1分）；

4）是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子的来源（1分）；

5）起酸碱度缓冲剂的作用（1分）；

6）提供蛋白酶抑制剂，使细胞传代时使用的胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。

五、论述题（10分）

简述动物细胞融合技术的主要应用领域

(1)　染色体的基因定位这是融合细胞技术应用的主要成果之一。（4分）

例如，将人体细胞与小鼠细胞融合，在杂种细胞系中，由于优先排斥的是人染色体，因此，每种细胞系都仅含有一条或若干条特异性的人染色体。通过对这些细胞系生理生化功能分析，就可以断定特定的人染色体的功能。实验已经证明，仅保留着1号人染色体的人-小鼠杂种细胞系，才能合成人尿苷单硷酸激酶，从而证实了编码这种激酶的人基因是定位在1号染色体上。

(2)　遗传疾病的治疗与基因互补分析（3分）

体细胞遗传学和分子遗传学研究证实，许多种人类疾病都与基因的突变或缺失有关，估计约有2000种以上的人类疾病是由单基因缺失引起的。通过细胞融合技术，将不同遗传缺陷的两种突变细胞融合，产生的杂种细胞由于基因的互补作用，便可恢复其正常的表型。

(3)　特殊活性物质的制备（3分）

例如，将能分泌胰岛素、生长激素、抗体等具有特殊功能的细胞，与在体外能长期传代存活的骨髓瘤细胞融合，就可能选择到既能生产特殊活性物质，又具长寿命的杂种细胞克隆系。因此，应用细胞融合技术，有可能得到生产生长激素、促性腺激素、催乳素、胰岛素、单克隆抗体等各种杂种细胞系。

07细胞工程试卷及答案