菌株培养操作规程

发布时间：2023-02-19 03:23:36

菌株培养操作规程1.菌株培养1.1仪器的灭菌将养菌所需的所有仪器放在高压锅内灭菌，然后放入烘箱烘干，在实验操作前30min放入无菌操作台，打开紫外灯，待用。1.2培养基的配制按照配方配置肉汤固体培养基250ml，肉汤液体培养基250ml，120度高压灭菌，放置于冰箱4℃备用。（培养基的配制参照《微生物学实验》，徐威主编，中国医药科技出版社，第172页，微生物实验常用培养基配方）1.3菌株传代将高压灭菌完的固体培养基在酒精灯上融化，待温度降到45℃左右，取无菌培养皿，打开，沿着培养皿一侧倒入固体培养基，倒入的量是培养皿体积的1/3时停止，将培养皿盖好盖子，放在无菌操作台上，待培养基凝固。取出从医院拿回的菌株（标记为F0代，一直储存在4℃，在操作前半个小时放在室温下适应），用接种环取一环接种于凝固好的固体培养基上，放入37℃细菌培养箱中培养18h。培养18h后，得到F1代菌，将其保存于冰箱4℃（从医院取回的菌株数量有限，并且不能长期保存，为了后面的实验有足量的菌株完成实验，所以大量传代得到F1代菌，保存于冰箱，以后的实验都是从F1代菌开始进行）。
2.菌株保存2.1菌株短期保存从医院取回的菌株（F0代）,通过传代得到F1代菌，用胶带将培养皿封存好，放置于冰箱4℃保存，称为短期保存。短期保存的时间一般为20天到一个月。2.2菌株的长期保存取无菌培养皿，倒入融化的固体培养基，待培养基凝固后，用接种环取一环F1代菌接种于培养皿上，放入37℃细菌培养箱培养18h得到F2代菌。用移液枪取2ml无菌液体培养基于试管中，用接种环取一环F2代菌接种于试管中，放入细菌培养箱培养8h。取100ml无菌锥形瓶，倒入50ml液体培养基，用移液枪从试管中取0.5ml菌液于100ml锥形瓶中，37℃摇床培养16h得到F3代菌。将买回的甘油配成80%浓度，然后将甘油和F3代菌液按体积比1:1混合，再用移液枪将混合液吸入冻存管中，1ml/管，在冻存管上用记号笔标记冻存菌液的名称，代数，日期，放入冰箱-20℃保存，保存年限为1-2年，此保存法称为“甘油管冻存法”。（菌种的保存参照《微生物学实验》，徐威主编，中国医药科技出版社，第61页）3.菌株浓度测定：混合平板培养计数法3.1平板编号分别取9支盛有4.5ml无菌生理盐水的试管，依次标记10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-,8，10-9，另取无菌平皿9套，分别编号10-7、10-,8、10-9各三皿。3.2待测菌稀释液的制备

菌株培养操作规程

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