中国图书分类号R392-33文献标识码A文章编号1004-5503(2007)02-150-03=综述>疫苗效价检测方法的研究王佑春=摘要> 本文对现行疫苗效价的检测方法及其要求进行了分析,并对新的检测方法,如假病毒中和试验、转基因动物实验和实时定量PCR在效价检测中的应用进行了介绍。=关键词> 疫苗;效价;中和试验;转基因小鼠;实时定量PCR疫苗效价是预测疫苗免疫保护效果的指标,主要是通过合适的实验室检测或临床使用所获得的数据反映出来(CFR60013,2005)。检测疫苗效价的目的主要包括:预测疫苗的保护效果;评价疫苗临床剂量反应关系,避免由于效价不合适造成免疫失败或毒性反应;为疫苗质量的一致性及稳定性提供数据,也可以为疫苗的桥接试验提供数据。疫苗效价的检测方法可以采用体内法或体外法,也可同时采用体内和体外两种方法(CFR610110, 2005)。一般情况下,分子特征的鉴别(如多糖的鉴别等)、抗原含量的测定、疫苗的免疫原性以及活疫苗的毒力滴定等均可作为疫苗效价的检测方法,但不同的疫苗可根据其特性,也可根据不同的目的,选择不同的方法。11对已批准的疫苗效价检测方法的分析美国FDA批准了28个类型的52种疫苗,覆盖24种不同的病原体,59种血清型。其中有针对14种不同病毒的24个型别的病毒性疫苗,大部分为减毒活疫苗,部分为灭活疫苗和重组疫苗;有针对10种不同细菌的35个型别的细菌性疫苗,其中33种为纯化疫苗,有效成分以亚单位、类毒素、多糖以及连接体(Con j u gated)形式存在,2种减毒活疫苗,其有效成分为减毒的活细菌。我国2005年药典收载了40种疫苗,针对10种病毒、11种细菌和1种螺旋体共22种病原体,其中包括减毒活疫苗、灭活疫苗、组分疫苗、基因重组疫苗以及联合疫苗等。减毒活疫苗主要通过病原体在体内的复制诱导机体产生免疫反应,因此,主要是通过检测减毒病原体的复制能力来检测其效价。病毒的复制主要表现作者单位:中国药品生物制品检定所细胞室(北京100050).通讯作者:王佑春,E-m ai:l w angyc@N1CPBP.org.cn 为在细胞基质上产生细胞病变。减毒活疫苗中存在感染性颗粒,也有非感染性颗粒。非感染性颗粒多为不成熟、不完整或降解的病毒,不是疫苗的主要成分,因此,活疫苗效价的检测主要是检测具有生物活性的感染性颗粒,方法有定量的蚀斑形成试验、终点滴定法(CC I D50)、病毒中和试验和定量PCR法等。定量的蚀斑形成试验方法简便,但特异性、精确性以及重复性较差,手工操作强度比较大。CC I D50法是一种半自动化的方法,但需要病毒滴度在一定范围内,其特异性、精确性以及重复性也比较差。定量PCR法可直接检测病毒复制,其特异性和敏感性比较高,精确性也得到了改善,但成本比较高。细菌的复制可表现为在固体培养基上形成菌落,因此可以通过计数菌落来评价其效价。其他疫苗是通过免疫原刺激机体产生免疫反应,因此,可通过检测其免疫原性、抗原性、中和活性以及含量来评价其效价。免疫原性试验主要是接种相关动物模型,检测其抗体或在动物中的保护力。这些方法可直接表明制品在动物体内的反应,但动物体内的反应是否均与人体中的反应相关还不清楚,而且该类试验需要大量的动物,劳动强度和变异性比较大。抗原性分析包括ELI SA法、体外相对效价法(平行线法)、竞争法和其他方法(如火箭电泳法)。该类试验主要检测表位的含量或完整性,其操作的自动化程度高,相对精确,但其与免疫原性以及在人体内的免疫反应是否相关也不清楚。中和试验是用特殊抗血清中和病原体的复制以及与表位的结合等。含量测定(M ass assay)主要是采用比色法或H PLC法检测多糖或蛋白等有效成分的含量,该类试验采用物理化学方法,变异较小,自动化程度高,相对比较精确,但应通过研究确定有效成分的含量与免疫原性及在人体中的免疫反应的关系。#150#中国生物制品学杂志2007年2月第20卷第2期Ch i n J B i o l og i cals February2007,Vo1.20No.2

疫苗效价检测方法的研究