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发布时间：2023-11-19 20:15:55
常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别1:DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argFU169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+,phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE33:BL21(DE3pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE3,pLysS,Camr4:JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC,φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu7697,galU,galK,rps,(StrrendA1,nupG6:HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-,recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI,BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:(1选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;
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