纳米蒙脱石散对细菌的抑菌试验

实验目的

掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法了解蒙脱石散对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌效果。

材料准备

1．器材：温箱、天平、牛津杯、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。

2．试剂：蒸馏水。

3．培养基：普通琼脂平板。

4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。

5．药品：纳米蒙脱石散。

6．0.5号麦氏比浊管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。

方法步骤

将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。

（一）材料准备

1．牛津杯 选用牛津杯（内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管，管的两端要光滑）放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。

2．药液的配制 用无菌蒸馏水将纳米蒙脱石散稀释至10%和20%浓度。

（二）测验方法

1. 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

2. 具体方式；挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面涂布均匀致密。

　3. 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的纳米蒙脱石散液，勿使其外溢。

　 4.　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

图1 浓度10%纳米蒙脱石散

图2 纳米蒙脱石散抑菌结果（大肠杆菌）

图3 纳米蒙脱石散抑菌结果（金黄色葡萄球菌）

判定标准

1. 药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

　 　表1　药物敏感实验判定标准

2. 药物敏感实验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。

结果分析

纳米蒙脱石散对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌无抑菌效果。

注意事项

1．接种菌液的浓度必须标准化，一般以细菌在琼脂平板上生长一定时间后呈融合状态为标准。如菌液浓度过大，会使抑菌环减小；浓度过小，会使抑菌环增大。

2．接种后应及时在牛津杯中滴入药物并放入37℃温箱中培养。

3．培养时间一般为16~24h，结果判定不宜过早，但培养过久，细菌可能恢复生长，使抑菌环缩小。

4．实验过程中要防止污染抗生素，否则可发生抑菌环缩小或无抑菌环现象

5．因蛋白胨可使磺胺失去作用，故磺胺类药物应采用无胨琼脂。

纳米蒙脱石散对细菌的抑菌试验