菠 菜 色 素 的 提 取 和 色 素 分 离

(Extraction of pigments from spinach and

chromagraphic isolation)

一．实验目的：

1. 学会薄层层析法对于有机物进行分离

2. 学会柱层析法对于有机物进行分离

3. 使用紫外光谱对于特定有机物进行分析

二．实验原理：

原理：色谱法

叶绿素a（R=CH3） 叶绿素b（R=CHO）

β-胡萝卜素（R=H） 叶黄素（R=OH）

维生素A

相对极性的大小为：叶绿素a 〉叶绿素b 〉叶黄素 〉胡萝卜素

由于甲醇的极性在它们之间，正好可以溶解叶黄素而不能溶解其他的三者，因此实际样品中只能洗脱出三个，按照洗脱剂极性从小到大的顺序出来的为胡萝卜素，叶绿素a，叶绿素b。

三．主要试剂及产物的物理常数：

四．主要试剂用量及规格：

硅胶G 中性氧化铝 95%甲醇 石油醚（沸程60－90℃） 丙酮 乙酸乙酯 菠菜叶

五．实验仪器装置：

旋转蒸发装置 柱色谱装置

柱色谱中的填充物从下至上分别为脱脂棉，石英砂、氧化铝、石英砂。

六．实验步骤及现象：

七．产品性状、外观、物理常数：

叶绿素a：在3：1：1正丁醇-乙醇-水的溶液中呈现蓝绿色

叶绿素b：在3：1：1正丁醇-乙醇-水的溶液中呈现黄绿色

胡萝卜素：在9：1石油醚-丙酮溶液中呈现橙黄色

叶黄素在甲醇溶液中与其他成分混合，为黄绿色，本身为黄色

八．薄层爬板分析：

板a和板b的最大区别在于叶绿素a和叶绿素b在不同极性的展开剂中分离速率明显不同

a的展开剂是石油醚-丙酮（8：2），极性较小，而叶绿素a和叶绿素b的极性较大，所以，“不太爬得动”，组分三由于有醇的存在，所以其叶绿素a和叶绿素b移动的速度明显比组分一中的叶绿素a和叶绿素b快。

b的展开剂是石油醚-乙酸乙酯（6：4），极性较大，所以其组分一和组分三中的叶绿素a和叶绿素b的比移值都明显比板a中的大，也是由于醇的影响，组分三的叶绿素a和叶绿素b的移动速度要比组分一中的快，但差别已没有板a中那么大。

胡萝卜素由于极性小，在两中展开剂中都有很大的比移值，在板a和板b中没有明显区别

最后，还想说一点柱层析中的装样品问题，原则是样品的浓度越大越好，只要恰好溶解色素就可以，这样可以使用层析的时候所有的组分的起点都能最大限度地相同。这需要在实践中多加练习和思考。

基础有机化学实验实验报告二