一般仪器设备

化验室常用玻璃仪器的洗涤和干燥

微生物检测仪器试剂

VITEK系列全自动微生物分析系统

理化检测仪器试剂

VIDAS和miniVIDAS

PH计操作规程

Hunterlab分光光度计操作规程

7230分光光度计操作规程

高效液相色谱法

薄层色谱法

化验室常用玻璃仪器的洗涤和干燥

　　　在分析工作中，洗涤玻璃仪器不仅是一项必须做的实验前的准备工作，也是一项技术性的工作。仪器洗涤是否符合要求，对检验结果的准确和精密度均有影响。不同的分析工作有不同的仪器洗净要求，我们以一般定量化学分析为主介绍仪器的洗涤方法。

（一）洁净剂及使用范围

　　最常用的洁净剂是肥皂，肥皂液（特制商品），洗衣粉，去污粉，洗液，有机溶剂等。

　　肥皂，肥皂液，洗衣粉，去污粉，用于可以用刷子直接刷洗的仪器，如烧杯，三角瓶，试剂瓶等；洗液多用于不便用于刷子洗刷的仪器，如滴定管，移液管，容量瓶，蒸馏器等特殊形状的仪器，也用于洗涤长久不用的杯皿器具 和刷子刷不下的结垢。用洗液洗涤仪器，是利用洗液本身与污物起化学反应的作用，将污物去除。因此需要浸泡一定的机会充分作用；有机溶剂是针对污物属 于某种类型的油腻性，而借助有机溶剂能溶解油脂的作用洗除之，或借助某些有机溶剂能与水混合而又发挥快的特殊性，冲洗一下带水的仪器将不洗去。如，甲苯，二甲苯，汽油等可以洗油垢，酒精，乙醚，丙酮可以冲洗刚洗净而带水的仪器。

（二）洗涤液的制备及使用注意事项

　　　洗涤液简称洗液，根据不同的要求有各种不同的洗液 。将较常用的几种介绍如下。

1.强酸氧化剂洗液

　　强酸氧化剂洗液是用重铬酸甲（K2Cr2O7）和浓硫酸（H2SO4)配成。K2Cr2O7在酸性溶液中，有很强的氧化能力， 对玻璃仪器又及少有侵蚀作用。所以这种洗液在实验室内使用最广泛。

　　配制浓度各有不同，从5~12%的各种浓度都有。配制方法大致相同：取一定量的K2Cr2O7（工业品即可），先用约1~2倍的水加热溶解，稍冷后，将工业品浓H2SO4所需体积数徐徐加入K2Cr2O7不溶液中（千万不能将水或溶液加入H2SO4中），边倒边用玻璃棒搅拌，并注意不要溅出，混合均匀，俟冷却后，装入洗液瓶备用。新配制的洗液为红褐色，氧化能力很强。当洗液用久后变为黑绿色，即说明洗液无氧化洗涤力。

　　例如,配制12%的洗液500mL。取60克工业品K2Cr2O7置于100mL水中（加水量不是固定不变的，以能溶解为度），加热溶解，冷却，徐徐加入浓H2SO4３４０mL，边加边搅拌，冷后装瓶备用。

　　这种洗液在使用时要切实注意不能溅到身上，以防“烧”破衣服和损伤皮肤。洗液倒入要洗的仪器中，应使仪器周壁全浸洗后稍停一会再倒回洗液瓶。第一次用少量水冲洗刚浸洗过的仪器后，废水不要倒在水池里和下水道里，长久会腐蚀水池和下水道，应倒在废液缸中，缸满后倒在垃圾里，如果无废液缸，倒年纪素养人生观不朽啊激素谈话法入水池时，要边倒边用大量的水冲洗。

２.碱性洗液

　　碱性洗液用于洗涤有油污物的仪器，用此洗液是采用长时间（２４小时以上）浸泡法，或者浸煮法。从碱洗液中捞取仪器时，要戴乳胶手套，以免烧伤皮肤。

　　常用的碱洗液有：碳酸钠液（Na2CO3,即纯碱），碳酸氢钠（Na2HCO3,小苏打），磷酸钠（Na3PO4,磷酸三钠）液，磷酸氢二钠（Na2HPO4)液等。

３. 碱性高锰酸钾洗液

　　用碱性高锰酸钾作洗液，作用缓慢，适合用于洗涤有油污的器皿。配法：取高锰酸钾（KMnO4)4克加少量水溶解后，再加入１０％氢氧化钠（NaOH)１００mL。

４.纯酸纯碱洗液

　　根据器皿污垢的性质，直接用浓硫酸（HCL）或浓硫酸（H2SO4)、浓硝酸(HNO3)浸泡或浸煮器皿（温度不宜太高，否者浓酸挥发刺激人）。纯碱洗液多采用１０％以上的浓烧碱（NaOH)、氢氧化钾（KOH) 或碳酸钠（Na2CO3)液浸泡或浸煮器皿（可以煮沸）。

５.有机溶剂

　　带有脂肪性污物的器皿，可以用汽油、甲苯、二甲苯、丙酮、酒精　、三氯甲烷、乙醚等有机溶剂擦洗或浸泡。但用有机溶剂作为洗液浪费较大，能用刷子洗刷的大件仪器尽量采用碱性洗液。只有无法使用刷子的小件或特殊形状的仪器才使用有机溶剂洗涤，如活塞内孔、移液管尖头、滴定管尖头、滴定管活塞孔、滴管、小瓶等。

６. 洗消液

　　检验致癌性化学物质的器皿，为了防止对人体的侵害，在洗刷之前应使用对这些致癌性物质有破坏分解作用的洗消液进行浸泡，然后再进行洗涤。

　　在食品检验中经常使用的洗消液有：１％或５％次氯酸钠（NaOCL) 溶液、２０％　HNO3和２%KMnO4溶液。

　　１％或５％NaOCL溶液对黄曲霉素在破坏作用。用１％NaOCL溶液对污染的玻璃仪器浸泡半天或用５％NaOCL溶液浸泡片刻后，即可达到破坏黄曲霉毒素的作用。配法：取漂白粉１００克，加水５００mL，搅拌均匀，另将工业用Na2CO3 ８０克溶于温水５００mL中，再将两液混合，搅拌，澄清后过滤，此滤液含NaOCL 为２.５％；若用漂粉精配制，则NaCO3 的重量应加倍，所得溶液浓度约为５％。如需要１％NaOCL溶液，可将上述溶液按比例进行稀释。

　　２０％HNO3溶液和２％　KMnO4溶液对苯并（a)芘有破坏作用，被苯并（a）芘污染的玻璃仪器可用２０％　HNO3浸泡２４小时，取出后用自来水冲去残存酸液，再进行洗涤。被苯并（a）芘污染的乳胶手套及微量注射器等可用２％KMnO4溶液浸泡２小时后，再进行洗涤。

（三）洗涤玻璃仪器的步骤与要求

１.常法洗涤仪器

　　洗刷仪器时，应首先将手用肥皂洗净，免得手上的油污附在仪器上，增加洗刷的困难。如仪器长久存放附有尘灰，先用清水冲去，再按要求选用洁净剂洗刷或洗涤。如用去污粉，将刷子蘸上少量去污粉，将仪器内外全刷一遍，再边用水冲边刷洗至肉眼看不见有去污粉时，用自来水洗3~6次，再用蒸馏水冲三次以上。一个细干净的玻璃仪器，应该以挂不住水珠为度。如仍能挂住水珠，仍然需要重新洗涤。用蒸馏水冲洗时，要用顺壁冲洗方法并充分震荡，经蒸馏水冲洗后的仪器，用指示剂检查应为中性。

2. 作痕量金属分析的玻璃仪器，使用1：1~1：9HNO3溶液浸泡，然后进行常法洗涤。

3. 进行荧光分析时，玻璃仪器应避免使用洗衣粉洗涤（因洗衣粉中含有荧光增白剂，会给分析结果带来误差）。

4.分析致癌物质时，应选用适当洗消夜浸泡，然后再按常法洗涤。

（四）玻璃仪器的干燥

　　作实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。用于不同实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于食品分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。应根据不同要求进行干燥仪器。

（1）晾干

　　不急等用的仪器，可在蒸馏水冲洗后在无尘处倒置处控去水分，然后自然干燥。可用安有木钉的架子或带有透气孔的玻璃柜放置仪器。

（2）烘干

　　洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105~110℃烘1小时左右。也可放在红外灯干燥箱中烘干。此法适用于一般仪器。称量瓶等在烘干后要放在干燥器中冷却 和保存。带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要主义慢慢升温并且温度不可过高，以免破裂。量器不可放于烘箱中烘。

　　硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。

（3）热（冷）风吹干

　　 对于急于干燥的仪器或不适于放入烘箱的较大的仪器可用吹干的办法。通常用少量乙醇、丙酮（或最后再用乙醚）倒入已控去水分的仪器中摇洗，然后用电吹风机吹，开始用冷风吹1~2分钟，当大部分溶剂挥发后吹入热风至完全干燥，再用冷风吹去残余蒸汽，不使其又冷凝在容器内。

　 VITEK系列全自动微生物分析系统

VITEK系列全自动微生物分析系统是法国 (生物梅里埃）生产的全自动微生物分析仪的一个系列，包括：VITEK－32、VITEK－60、VITEK－120等。

　　仪器的原理其实就是我们进行细菌鉴定中使用的生化反应。不过仪器把30个对细菌鉴定必需的生化反应培养基固定到卡片上，然后通过培养后仪器对显色反应进行判断，利用数值法进行判定。根据需要鉴定的微生物的种类的不同，设计了不同的鉴定卡片，比如革兰氏阴性菌卡，革兰氏阳性菌卡，酵母菌卡等。

　　试验2－6小时能出报告。判断是某种菌的可能性是百分之几。有时也需要进行其他一些试验来进一步确定，比如血清学反应等。

　　biosMerieumx的微生物鉴定仪是全世界最好的，但因微生物鉴定工作的特殊性，其仍不能完全代替人工。

　　右图是烟台出入境检验检疫局使用的VITEK32，仪器购买于1999年底。主要对进出口食品检验中发现的可疑致病菌进行最后鉴定。

　　下面是生物梅里埃公司自己对该仪器的介绍。

　　The VITEK?system corresponds perfectly to current bacteriological constraints, both in the clinical field and in industrial quality controls : automation provides more safety and eliminates repetitive manual operations, and the response time means that results can be provided more quickly than with manual techniques.
　　VITEK automates all the steps needed to perform identification tests, using VITEK cards. It comprises a filler/sealer, an incubator/reader, a computer and a printer. The filler/sealer enables inoculation of cards within a few minutes. The incubator/reader simultaneously incubates and reads the cards, and has a capacity of between 32 and 480 cards depending on the model. The computer with its VITEK software continuously monitors the operations under way, stores values, processes and interprets results.

　　关于鉴定卡：VITEK cards are ready to use, and are designed for bacterial identification using VITEK automated system. They are individually wrapped, which ensures that the tests are perfectly conserved before use. No larger than a credit card, they are not cumbersome to store or dispose of. After inoculation, they are sealed hermetically and can therefore be handled without any risk of contamination.

　　Each identification card comprises 30 wells which contain biochemical substrates in a dehydrated form. No additional reagents are needed, thus eliminating any risk of omission or error. VITEK identification covers over 300 species encountered clinically, and in the industrial field.

VIDAS和miniVIDAS

　　VIDAS是生物梅里埃公司生产的一种全自动免疫荧光酶标仪，在微生物检测中主要是利用酶联免疫的原理对微生物或毒素等进行筛选检测。

　　仪器分为普通型和一种小型设备，即miniVIDAS，这种型号国内使用较多。

　　左图就是我使用的miniVIDAS,购买于1999年，目前主要用于沙门氏菌、李斯特氏菌、大肠杆菌O157等致病菌的筛选。

　　下面是梅里埃公司自己的仪器介绍。大家自己看吧，我就不翻译了。

　　VIDAS and mini VIDAS : automated immunoanalysers

　　VIDAS is a multi-parameter automated immunoanalyser. It comprises an analytical module, a computer and a printer. The analytical module automatically performs all stages of the analysis, including printing out the full results. It contains five sections, each accepting 6 tests, and can handle 60 tests per hour. Thanks to its speed of reaction and sectioned architecture, VIDAS? is the ideal system for handling series of analyses and urgent tests. The computer module is used to manage and print out the results. It can handle up to four analytical modules simultaneously, giving the system a capacity of 240 tests per hour.

　　mini VIDAS is a compact version of the VIDAS system, with a built-in computer, keyboard and printer. It has 2 independent sections each accepting 6 tests, and can process up to 12 samples simultaneously.
　　The VIDAS technology is reliable in all situations, as confirmed by our operation mini VIDAS? on Mont Blanc.
　　With a range up to 70 assays VIDAS tests have applications in clinical diagnostics and industrial microbiological testing.

　　VIDAS test
　　VIDAS tests use ELFA technology (Enzyme Linked Fluorescent Assay), associating enzyme marking and fluorescence measurement. It is used on the VIDAS and mini VIDAS automated analyzers. Based on an inter-sample anti-contamination principle, VIDAS? tests are presented in individual, ready-to-use form. They contain a SPR and a strip :

　　the SPR (Solid Phase Receptacle) is the solid phase of the reaction. It is a disposable item, and acts as a sampling needle. This concept eliminates potential inter-sample contamination.
　　the strip contains all the reagents, ready for use.
　　At each stage in the immunoanalysis, the SPR repeatedly takes up the reagent and transfers it into the various wells of the strip, through to the final stage of the analysis. The last well is the reading well, where the final intensity of the reaction is measured by fluorescence.

　　VIDAS menu for industrial testing
　　VIDAS offers 8 assays for the rapid detection of pathogens in food products and environmental samples :
　　VIDAS Listeria, for detection of Listeria (validated by the AFNOR *)
　　VIDAS Listeria monocytogenes, for specific detection of Listeria monocytogenes (validated by the AFNOR *)
　　VIDAS Salmonella, for detection of Salmonella (validated by the AFNOR *)
　　VIDAS ICS, for salmonella immunoconcentration
　　VIDAS Staph enterotoxin, for detection of Staphylococcus A, B, C1, C2, C3, D and E enterotoxins
　　VIDAS Campylobacter, for detection of Campylobacter
　　VIDAS ECO, immunodetection of the potential presence of E.coli O157 using an optimized protocol in less than 24 hours.
　　VIDAS ICE, immunocapture to simplify the confirmation stage of the presence of E.coli O157 which is particulary delicate using the conventional method and to considerably reduce waiting time by avoiding time-consuming culture stage

PH计操作规程

1 Scope 范围：
本规程适用于DELTA320型PH计的操作
2 Procedures 步骤：
2．1 以旋转的方式把PH电极从保存液中拔出。
2．2 将PH电极用蒸馏水清洗后，将PH电极头浸入待测样品中（4cm）并搅拌30秒进行清洗。
2． 3 将PH电极和温度探棒浸入待测样品约（4CM），并使样品处于均匀搅拌状态，按READ鍵，启动测定过程，小数点会闪动。停几分钟让PH电极读数稳定。
2．4 将显示静止在终点数值上按READ鍵。
2．5 测量后，将电极用蒸馏水清洗，旋入保存液中。
2．6 启动一个新的测定过程，按READ鍵。
3 Note 注意 ：
3．1 测量时，温度探头要靠近PH电极。
3．2为避免电极受损，在关机前将PH电极从溶液中拿出。
3．3当仪器处于关机状态时，在电极浸入电极保存液之前，电极要与机器分开。
3． 4 为减少阻塞确保反应速度，电极的薄膜玻璃和透析膜必须保持湿润不干燥且经常更换保护液。
3． 5 不要用蒸馏水，去离子水，纯水长时间浸泡电极。
3．6 在将电极从一种溶液移入另一种溶液之前，用蒸馏水清洗电极。用纸巾将水吸干，切勿擦拭电极。
3．7 小心使用电极，切勿将之用作搅拌器。在拿放电极时，勿接触电极膜。
3．8 随时留意电极填充液是否干涸，请通知仪器分析技术员填充。将灌有正确填充液的电极竖直放置。
3．9 如果不使用ATC探测器，PH计则认为温度值为25℃

Hunterlab分光光度计操作规程

2. Purpose 目的：
本规程规定了Hunterlab分光光度计使用方法和注意事项、确保检测结果的准确性。
3. 操作方法
（1）.样品的制备：如果样品的DS值高于30DS时应将样品稀
至30DS，同时调节PH为4.5。
（2）.将调好的样品在超声波水浴中除去气泡。
（3）.将除去气泡的样品小心地倒入清洁的比色池内，放入比色
架上，且比色池的光洁面对准镜头并靠紧。关上仪器上盖，
（4）打开微机桌面上的Shortcut to Univevser图标，在工作站中单
击Read Smp图标，出现一个对话框，单击OK，在工作站中
出现一组数据，记录在a b栏中的数据。
（5）在微机中找到Excel Colour Caculate的工作表中的计算公式，
在Sample :In Process Sample Low Dry Subsrance的公式表格中
输入已记录的a b值 即可算出样品的色值。
（6）样品测定结束后，将样品池清洗干净，放在干燥处，以备下
次使用

7230分光光度计操作规程

2 Purpose 目的：
本规程规定了7230分光光度计的使用方法和注意事项、确保检测结果的准确性。
3 Index of technique 技术指标：
波长范围：330-900NM 波长准确度：+2NM
波长重复性：2NM 100%τ（T）稳定性：+0.5τ（T）/3分钟
透射比(透过率)准确度:<1.5%τ（T） 透射比重复性:0.5τ（T）
透射比范围:0.0%τ（T）--110.0%τ（T） 吸光度范围:-0.041-1.999
波长范围:0.000-9999 (T)A转换精度:0.1%τ（T）
4 procedures步骤
4、1 启动电源开关，仪器显示"F7230"，预热30分钟。
4、2 调节波长旋钮使波长移到所需之处。
4、3 按"CLEAR"键，仪器显示"YEA"
4、4 按"MODE"键，使显示τ（T）状态或A状态。
4、5 四个比色皿，第一个放入参比试样，其余三个放入待测试样，将比色皿放入样品池内的比色皿架上，夹子夹紧，盖上样品池盖。
4、6 将参比试样推入光路，按"100%τ" 键，至显示"T100.0"或"A0.000" .
4、7 打开样品池盖，按"0%τ"键，显示"T0.0"或"A E1".
4、8 盖上样品池盖,按"100%τ"键,至显示"T100.0"或"A0.000"
4、9 将待测试样推入光路,显示试样的τ（T）值或A值.
4、10 按 "PRINT"键打印数据.
5 注意:
5、1 每次测量前,检查波长是否所需值.
5、2 比色皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比色皿应用蒸馏水清洗干净后放起。若比色皿内有颜色挂壁，可用无水乙醇浸泡清洗。 5、3 向比色皿中加样时，若样品流到比色皿外壁时，应以滤纸點干，镜头纸擦净后测
量，切忌用滤纸擦拭，以免比色皿出现划痕。
5、4 样品池敞开时，不准按压池右侧突起的挡光板，以免损坏光电管。

色谱分析法基本原理

色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。

吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。

分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。

离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有有机溶剂的缓冲液。

排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或有机溶剂为流动相。

色谱法的分离方法，有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱所用溶剂应与试样不起化学反应，并应用纯度较高的溶剂。色谱时的温度，除气相色谱法或另有规定外，系指在室温下操作。

分离后各成分的检出，应采用各单体中规定的方法。通常用柱色谱、纸色谱或薄层色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区分，对有些无色物质，可在245-365nm的紫外灯下检视。纸色谱或薄层色谱也可喷显色剂使之显色。薄层色谱还可用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光熄灭法检视。用纸色谱进行定量测定时，可将色谱斑点部分剪下或挖取，用溶剂溶出该成分，再用分光光度法或比色法测定，也可用色谱扫描仪直接在纸或薄层板上测出，也可用色谱扫描仪直接以纸或薄层板上测出。柱色谱、气相色谱和高效液相色谱可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测。柱色谱还可分部收集流出液后用适宜方法测定。 柱色谱法

所用色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管，下端用棉花或玻璃纤维塞住，管内装有吸附剂。色谱柱的大小，吸附剂的品种和用量，以及洗脱时的流速，均按各单体中的规定。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀，以保证良好的分离效果，除另有规定外通常多采用直径为0.07-0.15mm的颗粒。吸附剂的活性或吸附力对分离效果有影响，应予注意。

吸附剂的填装 干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。 俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将柱表面相平时，即加试样溶液。

试样的加入 除另有规定外，将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起。或将试样溶于适当的溶剂中。与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

洗脱 除另有规定外，通常按流动相洗脱能力大小，递增变换流动相的品种和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变流动相的品种和比例。操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。

纸色谱法

以纸为载体，用单一溶剂或混合溶剂进行分配。亦即以纸上所含水分或其他物质为固定相，用流动相进行展开的分配色谱法。

所用滤纸应质地均匀平整，具有一定机械强度，必须不含会影响色谱效果的杂质，也不应与所用显色剂起作用，以免影响分离和鉴别效果，必要时可作特殊处理后再用。 试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描仪测定。 1、下行法 所用色谱缸一般为圆形或长方形玻璃缸，缸上有磨口玻璃盖，应能密闭，盖上有孔，可插入分液漏斗，以加入流动相。在近缸顶端有一用支架架起的玻璃槽作为流动相的容器，槽内有一玻璃棒，用以支持色谱滤纸使其自然下垂，避免流动相沿滤纸与溶剂槽之间发生虹吸现象。

取适当的色谱滤纸按纤维长丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端适当的距离（使色谱纸上端能足够浸入溶剂槽内的流动相中，并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处）用铅笔划一点样基线，必要时色谱纸下端可切成锯齿形，以便于流动相滴下。 将试样溶于适当的溶剂中，制成一定浓度的溶剂。用微量吸管或微量注射器吸取溶剂，点于点样基线上，溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干。样点直径一般不超过0.5cm，样点通常应为圆形。

将点样后的色谱滤纸上端放在溶剂槽内，并用玻璃棒压住，使色谱纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂，点样基线在支持棒下数厘米处。色谱开始前，色谱缸内用各单体中所规定的溶剂的蒸气饱和，一般可在色谱缸底部放一装有流动相的平皿，或将浸有流动相的滤纸条附着在色谱缸的内壁上，放置一定时间，俟溶剂挥发使缸内充满饱和蒸气。然后添加流动相，使浸没溶剂槽内滤纸，流动相即经毛细管作用沿滤纸移动进行展开至规定距离后，取出滤纸，标明流动相前沿位置，俟流动相挥散后按规定方法检出色谱斑点。

2、上行法 色谱缸基本和下行法相似，唯除去溶剂槽和支架，并在色谱缸盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上。色谱滤纸一般长约25cm，宽度则视需要而定。必要时可将色谱滤纸卷成筒形。点样基线距底边约2.5cm，点样方法与下行法相同。色谱缸内加入适量流动相，放置，俟流动相蒸气饱和后，再下降悬钩，使色谱滤纸浸入流动相约0.5cm，流动相即经毛细管作用沿色谱滤纸上升，除另有规定外，一般展开至15cm后，取出晾干，按规定方法检视。

色谱可以向一个方向进行，即单向色谱；也可进行双向色谱，即先向一个方向展开，取出，俟流动相完全挥发后，将滤纸转90°，再用原流动相或另一种流动相进行展。亦可多次展开，连续展或径向色谱等。

薄层色谱法

按各单体所规定的载体，放入适当容器，加入适量水以配成悬浮液，在厚度均匀一致的50×200mm或200×200mm平滑玻璃板上将此悬浮液均布成0.25mm的厚度，风干后一般在110度下干燥0.5-1h（或按单体规定）。

以离薄层板一端约25mm的位置作为点样基线，用微量吸管按规定量吸取试样液和对照（标准）液，点于基线上，点与点之间的距离在10mm以上，液点的直径约3mm，风干后，基线一端向下，将薄层板放入展开溶剂，溶剂层深10mm，并预经开展溶剂的蒸汽饱和。在展开溶剂从基线上升至规定距离（一般为15cm）后，取出薄层板，风干，然后按规定的方法，对斑点的位置和颜色进行检查。

气相色谱法

气相色谱法是在以适当的固定相做成的柱管内，利用气体（载气）作为移动相，使试样（气体、液体或固体）在气体状态下展开，在色谱柱内分离后，各种成分先后进入检测器，用记录仪记录色谱谱图。 在对装置进行调试后，按各单体的规定条件调整柱管、检测器、温度和载气流量。进样口温度一般应高于柱温30-50度。如用火焰电离检测器，其温度应等于或高于柱温，但不得低于100度，以免水汽凝结。色谱上分析成分的峰的位置，以滞留时间（从注入试样液到出现成分最高峰的时间）和滞留容量（滞留时间×载气流量）来表示。这些在一定条件下，就能反应出物质所具有特殊值，并据此确定试样成分。

根据色谱上出现的物质成分的峰面积或峰高进行定量。峰面积可用面积测定仪测定，按半宽度法求得（即以峰1/2处的峰宽×峰高求得）。峰高的测定方法是从峰高的顶点向记录纸横座标准垂线，找出此垂线与峰的两下端联结线的交点，即以此交点至峰顶点的距离长度为峰高。

定量方法可分以下三种：

1、内标准法 取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制标准溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图取标准被测成分的峰面积和峰高和内标物质的峰面积和峰高的比例为纵座标，取标准被测成分量和内标物质量之比，或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。

然后按单体中所规定的方法调制试样液。在调制试样液时，预先加入与调制标准液时等量的内标物质。然后按制作标准曲线时的同样条件下得出的色谱，求出被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰积或峰高之比，再按标准曲线求出被测成分的含量。

所用的内标物质，应采用其峰面积的位置与被测成分的峰的位置尽可能接近并与被测成分以外的峰位置完全分离的稳定的物质。

2、绝对标准曲线法 取标准被测成分 按依次增加或减少阶段法，各自调制成标准液，注入一定量后，按色谱图取标准被测成分的峰面积或峰高为纵座标，而以标准被测成分的含量为横坐标，制成标准曲线。然后按单体中所规定的方法制备试样液。取试样液按制标准曲线时相同的条件作出色谱，求出被测成分的峰面积和峰高，再按标准曲线求出被测成分的含量。 3、峰面积百分率法 以色谱中所得各种成分的峰面积的总和为100，按各成分的峰面积总和之比，求出各成分的组成比率。

气液色谱法

这时所指的气液色谱法，主要用于各种香料物质的分析，基本条件和参数主要依照美国精油协会（EOA）于1979年所建议的方法。其基本原理、操作、标准状态等均与上述气相色谱法相同。

1、柱 用304号合金所制不锈钢管，长3m，内径2.16-2.57mm，外径3.18mm。底物：极性柱为聚乙二醇20M（Carbowax 20M）,分子量约2万；非极性柱为气相色谱级甲基硅氧烷（SE-30），或二甲基硅氧烷（OV-1或OV-101）。底物浓度：重量的105。固体载体：10目或20目熔融煅烧过的硅藻土，经硅烷化和酸洗后，其自由倾落密度为0.2g/cm3，最小120目，最大80目。装填密度每cm3应大于0.24g。

2、载气 氦。最低流量为每分钟25-50ml。

分析状态
极性柱：起始温度，最低75度；最终温度，最高225度。升温速度，每分钟2-8度。
非极性柱：起始温度，最低75度；最终温度，不超过275度；升温速度，每分钟2-8度。
进样温度：225-250度。试样量：0.1-1ul。

检测器：用热导池。检测器的操作条件应维持恒定。

高效液相色谱法

　　高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。

1.对仪器的一般要求

　　所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料,用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检测器时,所用流动相应符合紫外分光光度法（附录Ⅳ Ａ）项下对溶剂的要求。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变, 以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2.系统适用性试验

　　按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子.

(1) 色谱柱的理论板数(n) 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t<[R]>（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（W<[h/2]> ）,按n＝5.54(t<[R]>／W<[h/2]>)<2>计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。 (2) 分离度 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为：　2(t<[R2]>－t<[R1]>) R＝ ──W<[1]>＋W<[2]> 式中 t<[R2]>为相邻两峰中后一峰的保留时间； t<[R1]>为相邻两峰中前一峰的保留时间； W<[1]>及W<[2]>为此相邻两峰的峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5。

(3) 拖尾因子 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子(T)是否符合各品种项下的规定,或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为： W<[0.05h]> T＝────── 2d<[1]> 式中 W<[0.05h]>为0.05峰高处的峰宽； d<[1]>为峰极大至峰前沿之间的距离。 除另有规定外，T应在0.95～1.05间。 也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次,计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0％。

3.测定法

　　定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。

(1) 面积归一化法 测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外,可为该品种项下主成分保留时间的倍数。

(2) 主成分自身对照法 当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。

(3) 内标法测定供试品中杂质的总量限度 采用不加校正因子的峰面积法。取供试品,按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液,注入仪器,记录色谱图Ｉ;再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。 如果色谱图Ⅰ中没有与色谱图Ⅱ上内标峰保留时间相同的杂质峰，则色谱图Ⅱ中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）。如果色谱图Ⅰ中有与色谱图Ⅱ上内标物质峰保留时间相同的杂质峰，应将色谱图Ⅱ上的内标物质峰面积减去色谱图Ⅰ中此杂质峰面积，即为内标物质峰的校正面积；色谱图Ⅱ中各杂质峰总面积加色谱图Ⅰ中此杂峰面积，即为各杂质峰的校正总面积，各杂质峰的校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。

(4) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定,精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： A<[s]>／m<[s]> 校正因子（f）＝─ A<[r]>／m<[r]> 式中 A<[s]>为内标物质的峰面积或峰高； A<[r]>为对照品的峰面积或峰高； m<[s]>为加入内标物质的量； m<[r]>为加入对照品的量。 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： A<[x]> 含量（m<[x]>）＝f×──A<[s]>／m<[s]> 式中 A<[x]>为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； m<[x]>为供试品（或其杂质）的量； f、A<[s]>和m<[s]>的意义同上。 当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。

(5) 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： A<[x]> 含量（m<[x]>）＝m<[r]>×── A<[r]> 式中各符号意义同上 由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。

薄层色谱法

　
　　薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

1.仪器与材料

(1) 玻板 除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

(2) 固定相或载体 最常用的有硅胶G、硅胶GF<[254]> 、硅胶H、 硅胶HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F<[254]>等。 其颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上, 后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5～0.7％)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。

(3) 涂布器 应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

(4) 点样器 同纸色谱法项下。

(5) 展开室 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。

2.操作方法

(1) 薄层板制备 除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。

(2) 点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 (3) 展开 展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。 将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）,密封室盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm),取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

(4) 如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。 薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

一般仪器设备管理知识