第一章文献综述

金银花研究进展

金银花，别名双花、二花、忍冬花、二宝花，为忍冬科植物忍冬((Lonicerajaponica Thunb )、红腺忍冬(Lonicera hypoigLauca Miq )、华南忍冬(Loniceraconfusa DC.)和毛花柱忍冬(Lonicera dasystyLa Rehd)的花蕾或初放的花。金银花作为一种常用中药，在《名医别录》中被列为上品2005年以前颁布的药典将忍冬科植物忍冬、红腺忍冬、山银花和毛花柱忍冬统一作为金银花的药源收录，而2005版药典将原收录的金银花分为金银花(Flos Lonicerae japonicae )和山银花(Flos Lonicerae) 2个品种进行收录，金银花只收录了“忍冬”一个种，而把“灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-Mazz. )”、“红腺忍冬”、“华南忍冬(Loniceraconfusa DC.)”作为山银花的来源。 金银花外形呈棒状，上粗下细，长2-3.5cm外表淡黄色，久贮色深。密生短柔毛及腺毛，下部有细小的花尊，黄绿色，先端5裂。开放者，花冠筒状，顶端开裂成唇形;上唇4裂，下唇不裂。筒内有雄蕊5枚，附于筒壁;雌蕊1枚，长于雄蕊，子房无色，气香，味淡，微苦。花期5一7月，果期7一10月。除金银花植物的花外，其叶、藤均可入药。

金银花植物种类繁多，全世界忍冬科植物约200种，我国有98种，广泛分布于全国各地。而以西南、华南种类最多，其中可供药用的达47种，所有这些种类可分为2类:道地药材和地方习用药材。近30多年来，随着金银花需求越来越大，金银花在我国己进行广泛的人工栽培，栽培的主要地区有山东、河南、湖南、广西、贵州、重庆等省市区。湖南是80年代初开始发展起来的新产区，现已成为全国最大的金银花产区之一。各地栽培的品种主要有山东的忍冬(生产上俗称济银花)、河南的密银花、湖南的灰毡毛忍冬(俗称大叶山银花)。近年来，各地药农和中药育种工作者，利用各地品种的优良性状进行杂交育种或充分利用自然变异材料，根据不同的需求，培育出许多性状优良的新品种，并进行无性快速繁殖扩大种植规模。如湖南的“湘蕾”系列、山东的“亚特”系列、河南的树形金银花、广东和广西的盆栽金银花等都是非常有名的人工培育的新品种，并已进行大规模种植。由于新品种具有许多明显的优良性状，在生产上得到迅速推广，栽培面积迅速扩大，原有通过野生资源驯化的栽培品种将慢慢被新品种取代。

近年来，金银花的用途越来越广泛，开发的产品越来越多，社会对它的需求总量越来越大。我省是全国最大的金银花产区之一，主要栽培的品种有湘蕾金银花和灰毡毛忍冬，种植面积超过25万亩，年产量达3万吨，金银花产业己成为我省山区特色农业经济。但是，随着2005版《中华人民共和国药典》将原来的金银花分为金银花和山银花两种品种后，只有忍冬的花蕾可作为药用金银花来源，而我省大规模种植的金银花只能作为山银花使用。此外，目前国内作为药用金银花原料标准的都是金银花而非山银花。因此，我省山银花的销售市场和药用的合法性将受到巨大的挑战，山银花的综合开发利用研究迫在眉睫。因此，湘蕾金银花的药理性质，比较湘蕾金银花和金银花的药理作用，为山银花作为药用金银花及其他应用提供理论依据。

根据文献资料报道，我国有20余种忍冬科忍冬属植物的花蕾当金银花入药。早期，以山东、河南生产的济银花、密银花产量最大。近20多年来，灰毡毛忍冬由于大量的人工栽培，已逐渐成为市场上的主导品种，种植规模和产量最大，由于其绿原酸含量比济银花、密银花高，在中成药投料中已成为最主要的原料。地处雪峰山的湖南省隆回县小沙江地区与毗邻的淑浦县龙庄湾地区已成为全国最大的金银花产地之一，并形成专业的金银花产品交易市场。自1997年发现并选育出灰毡毛忍冬自然变异株—湘蕾金银花至今，湘蕾金银花栽培在湘、黔、鲁等省得到推广，年产干金银花达8000吨以上，为当地农民产生了巨大的经济效益。

1.1金银花化学成分

金银花的化学成分分析表明，金银花含人体必须的30多种元素，其活性成分主要为有机酸类、黄酮类、三菇皂营类、挥发油及微量元素等。

1.1.1有机酸类

有机酸类包括绿原酸、咖啡酸、肉豆范酸及棕搁酸等，其中绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分，包括绿原酸C,sH,909 (Chlorogenic acid)、异绿原酸(Isochlomgenic acid)和咖啡酸(Caffeic acid) 17,111，其中咖啡酸是绿原酸的水解产物。异绿原酸为一混合物，有7种异构体，分别为4, 5一二咖啡酸酞奎尼酸、3,4一二咖啡酸酞奎尼酸、3, 5一二咖啡酸酞奎尼酸、1, 3一二咖啡酸酞奎尼酸、3一阿魏酞奎尼酸、4一阿魏酞奎尼酸、5一阿魏酞奎尼酸，而3, 5一二咖啡酸奎尼酸为其主要成分。

从金银花水溶性部分中经乙酞化得到绿原酸四乙酞化合物;从金银花氯仿萃取物中分离得到肉豆范酸与棕搁酸;从吊子银花乙酸乙醋萃取物中分离得到绿原酸。用紫外分光光度法测定了忍冬不同部分绿原酸的含量，

结果表明:忍冬各部位中都有一定的绿原酸，但含量高低不同，依次为花>叶>茎>根，叶中绿原酸的含量是花的69.6396。金银花越冬老叶中绿原酸含量约为药用金银花的1.41倍、忍冬藤的9.08倍，表明金银花不仅是花可以作为药用，而且金银花的叶茎都可以充分的利用起来。

1.1.2黄酮类化合物

从金银花中分离出4种黄酮类化合物，分别鉴定为木犀草素-7-0- a -D-葡萄糖营，木犀草素一7-0- 0 -D一半乳糖营，棚皮素一3-0- 0 -D-葡萄糖昔及金丝桃营。黄丽英等〔12，从金银花氯仿萃取物中又分离得到5-经基一3'，4'，7一三甲氧基黄酮。对细毡毛忍冬花蕾进行研究，分离得到了木犀素.

早期，以山东、河南生产的济银花、密银花产量最大。近20多年来，灰毡毛忍冬由于大量的人工栽培，已逐渐成为市场上的主导品种，种植规模和产量最大，由于其绿原酸含量比济银花、密银花高，在中成药投料中已成为最主要的原料。地处雪峰山的湖南省隆回县小沙江地区与毗邻的淑浦县龙庄湾地区已成为全国最大的金银花产地之一，并形成专业的金银花产品交易市场。自1997年发现并选育出灰毡毛忍冬自然变异株—湘蕾金银花至今，湘蕾金银花栽培在湘、黔、鲁等省得到推广，年产干金银花达8000吨以上，为当地农民产生了巨大的经济效益。

1.1.5微量元素

金银花含微量元素共15种:Fe, Mn, Cu, Zn, Ti, Sr, Mo, Ba, Cr, Pb,V, Co, Li, Ca 等.

1.2金银花的药理作用

金银花为常见中药，其临床应用极为广泛，其主要作用有抗病原微生物(细菌、真菌、病毒)作用、抗炎解热作用、保肝利胆、止血作用、抗生育作用、抗氧化作用、免疫调节作用、降血脂作用、中枢兴奋等作用。

1.2.1抗病原微生物作用

金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用，这些病原菌包括引起中医热毒证的金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、脑膜炎双球菌;引起肠道急性热性感染的伤寒杆菌、副伤寒杆菌、志贺氏菌、福氏痢疾杆菌以及霍乱弧菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、结核杆菌等。用金银花提取液对不同血清型变形链球菌进行抑菌试验，该研究表明金银花提取液主要是抑菌作用,利用金银花水提液对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、甲型溶血性链球菌进行抑菌实验，结果表明金银花对这几种细菌均具有很好的抑菌作用。用金银花叶提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行抑菌作用，研究表明金银花叶提取物也有一定的抑菌作用。

金银花有抗病毒作用，对流感病毒、孤儿病毒、疙疹病毒增多有抑制作用；研究表明绿原酸对常见呼吸道病毒有较强的抑制作用。

金银花对皮肤真菌也有一定的抑制作用，此外金银花对革兰阴性细菌内毒素有较强的拮抗作用。

关于金银花抑菌、抗病毒有效成分一般认为是绿原酸类化合物，双花醇即有较强的体外抗菌活性，而芳樟醇、香叶醇、a一松油醇等也具有明显抗菌抗病毒作用。

1.2.2抗炎及解热作用

金银花具有明显抗炎作用。注射给药时可明显抑制新鲜鸡蛋清、鹿角菜胶等所致大鼠脚踌水肿，明显抑制巴豆油性肉牙囊大鼠的炎性渗出和炎性增生，于体外还能抑制人的x一球蛋白的热变性。从黄褐毛忍冬花中提取到的黄褐毛忍冬具有显著抗炎活性发现Lonicerosidea和Lonicerin两种单体的抗炎止痛作用。对金银花解热、抗炎、免疫等实验研究结果表明，其水煎剂、口服液和注射液对角叉菜胶、三联菌苗致热有不同程度的退热作用，对蛋清、角叉菜胶、二甲苯所致水肿亦有不同程度的抑制作用，动物实验表明，金银花水提液能显著促进白细胞的吞噬功能，使受损伤淋巴细胞接受抗原信息功能提高到正常水平，使受损伤淋巴细胞母细胞化反应恢复正常，还能显著增强IL2的产生，使受损淋巴细胞抗体产生能力显著增强

1.2.3保肝利胆作用

金银花所含多种绿原酸类化合物具有显著的利胆作用，可增进大鼠胆汁分泌。动物实验表明，金银花中的三菇皂昔对CC从引起的小鼠肝损伤有明显的保护作用，黄褐毛忍冬总皂普能显著抑制CC 14、对乙酞氨基酚及D一半乳糖胺所致肝中毒小鼠血清ALT的升高，同时降低肝脏甘油三醋含量，并明显减轻肝脏病理损伤的严重程度，使肝脏点状坏死数总和及坏死改变出现率明显降低。而且金银花还能显著降低多种模型小鼠血清胆固醇(Tc)及动脉粥样硬化指数(AI)，提高高密度脂蛋白一胆固醇(HDLG)含量，保护胰腺p细胞及降糖作用。另外，对乙酞氨基酚所致小鼠急性肝损伤也有明显的保护作用。

1.2.4止血作用

金银花炭水煎液、混悬液具有显著的止血作用，且混悬液的作用强于水煎液。金银花炭中蹂质的含量仅为生品的1/2，但其止血作用明显优于生品，

1.2.5抗生育作用

金银花乙醇提取后的煎剂注射给药，对小鼠、狗、猴等多种动物具有抗生育作用。

1.2.6抗氧化作用

金银花对烫伤小鼠中性粒细胞释放H,Oz有一定程度的改善作用，能使烫伤小鼠中性粒细胞合成和释放溶酶体酶的能力相应减少，说明其具有抗氧化反应的作用。

1.2.7毒副作用

金银花水浸液灌服对家兔、犬等无明显毒性反应，对呼吸、血压、尿量均无影响，

目前，金银花的应用广泛，如在医药方面、保健食品方面、化妆品方面、花

卉观赏方面等。

1.3.1医药上的应用

1.3.1.1古代医学的应用

性味归经:味甘，性寒。归肺、胃、大肠经

功效:清热解毒，疏散风热。

主治:痈肿疗疮，外感风热，瘟病初起，热毒血痢。金银花甘寒，长于清气

分热邪、透营达气、解火毒、消痈肿，且清热解毒之力颇强，为疮疡用药。其气

清香，宣散平和，清热而不伤气，化热而不伤阴，故为治疗温热火毒之佳品。

常用于治疗:①疮痈初起，红热肿痛者:②疗疮肿毒，红肿热痛，坚硬根深者;③肠痈腹痛:④肺痈咳吐脓血者;⑤肺经热邪，心胃热毒者;⑥热入营血，舌绛神昏，心烦少寐者。本品有透营转气之功，性寒而香，善解热毒，消臃滞，凉血热，止泻痢，故常用于热毒血痢，便脓血者。《神农本草经》把其列为上品，《名医别录》记述了它有治疗“暑热身肿”的功能。李时珍在《本草纲目》称它可以“久服轻身，长年益寿”。古代名医陶弘景更对它的药用作了如下评述:“忍冬煮汁酿酒饮，补虚疗风。此既长年益寿，可常采用，而仙经少用。凡易得之草，人多不肯为之，要求难得者，贱近而贵远，庸人之情也”

1.3.1.2现代医学的应用

现代药理学研究表明:金银花具有抗病原微生物、抗炎、解热、保肝、抗生育、止血、免疫调节、降血脂、中枢兴奋等作用。可用治40多种疾病，如呼吸道感染，细菌性感染，急性扁桃体炎，高热症，梅核气(慢性咽喉炎)，小儿肺炎，腮腺炎，小儿风疹矽肺合并肺部感染，阑尾炎，阑尾脓肿，钩端螺旋体，乳腺炎,急性肾盂肾炎，胆汁返流性胃炎，肝炎，急性肠炎，菌痢，慢性肠炎，急性阿米巴痢疾，妊娠早期急性尿路感染性附件炎，高血脂症，慢性骨髓炎，复发性口疮，皮肤病，褥疮，肿瘤放疗化疗口干症等常见病和疑难杂证

1.3.2其他方面的应用

金银花经过一定工艺处理后，制成色香味俱全，同时又保留有金银花原有保健功能的金银花茶，金银花饮料，金银花糖果等，还可作为香料，代替部分啤酒花;;在化妆品和日用保健品中的应用，如制成的银花露、银仙牙膏、忍冬花牙膏、金银花痒子水等均受到广大消费者的欢迎〔521。同时，金银花原植物有的常绿，有的半常绿，花期长，花型漂亮，且对二氧化硫有抗性，很多人把它放入室内作为观赏植物。金银花还可作为牲畜的青饲料，既可以作为食物来源，又可以起到抗菌消炎，清热解毒的作用。

3研究的目的、意义及主要内容

3.1研究的目的和意义

随着现代科学技术及社会的飞速发展，人们对生活水平的要求不断提高，生活质量大大改善，人类健康己成为当今世界研究的主题之一。人们对绿色保健药品及绿色安全食品的需求越来越迫切，开发和利用天然植物为人类造福，是当前的发展趋势，也是世界上最有前途，最有生气的朝阳产业之一。

目前，人们不管对食品还是对药品都心存恐惧，其主要原因在于抗生素药物残留相当严重以及对病菌易产生耐药性，国外已经逐步采用禁止和限制应用的措施。然而，由于抗生素作为一种抗菌类常用药，需求量大，给禁止和限制使用带来困难。但是，如果能在植物次生代谢物中寻找一些替代抗生素的天然药物，既能解决抗生素泛用导致的耐药性问题，又能满医疗的需求。而其中特别是中药的残留量少，且对病原菌不易产生耐药性，有利于人们的健康和环境保护，选择天然产物作为抗生素类药物替换品将具有重要意义。中草药金银花具抗菌消炎作用，而且其临床应用广泛，药用历史悠久，资源丰富，它能否代替部分抗生素作为抗菌类药，值得研究，这也是本试验的目的之一。

2结果与分析

2.1金银花提取物的体外抑菌作用

2.1.1不同溶剂提取物的抑菌效果

2.1.1.1金银花水提物对5种细菌的抑菌效果

结果见表2.1，试验得知，金银花水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、链球菌以及肺炎双球菌均有一定的抑菌效果。从3种金银花水提物的抑菌效果来看，其中湘蕾对前4种菌的抑菌效果表现为极敏，对后1种菌表现为高敏。灰毡毛水提物的抑菌效果与湘蕾水提物相当((P<0.05)，而济银花水提物的抑菌效果相对较差((P<0.01)。与氨节青霉素(25 mg/mL)相比，湘蕾水提物的抑菌效果稍差些，但它的粗提物能达到这样的抑菌效果也有开发的价值。

从表2.2可看出，金银花超渣提取物仍具有一定的抑菌效果，对5种细菌均表现为高敏或中敏。对同种细菌的抑菌效果而言，在3种超渣水提物抑菌效果中，灰毡毛水提物的抑菌效果与湘蕾相似((P<0.05)，而济银花水提物的抑菌效果相对较差((P>0.05)。

金银花70%醇提物对5种细菌的抑菌效果

金银花70%醇提物对5种细菌的体外抑菌作用表明，70%醇提物对上述5种细菌均有抑菌作用，且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、链球菌为极敏，对肺炎双球菌为高敏，其中最大的抑菌直径达26.1 mm。在3种70%醇提物中，湘蕾70%醇提物的抑菌效果与灰毡毛相似((P<0.05)，而济银花相对较差((P>0.05);与对照相比，湘蕾70%醇提物抑菌效果高于或相当于氨节青霉素((P<0.05)。结果见表2.3.

从表2.4可得出，金银花超渣70%醇提物也对这5种细菌有不同程度的抑菌作用，湘蕾在这3种金银花中表现极为突出，它的70%醇提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌表现为极敏，而对福氏痢疾杆菌和肺炎双球菌表现出高敏。与灰毡毛和济银花比较，湘蕾70%醇提物的抑菌效果与母本灰毡毛相似(P<0.05), 但比济银花显著((P>0.05)。与未经超临界萃取的70%醇提物相比，抑菌直径降幅很大，最大的达到6.7mm

表2.5表明，3种金银花95%醇提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、链球菌以及肺炎双球菌均有不程度的抑菌效果。湘蕾95%醇提物对前3种菌表现为极敏，对后两种菌表现为高敏:与灰毡毛和济银花相比，湘蕾95%醇提物的抑菌效果与灰毡毛相似((P<0.05 )，比济银花显著(P<0.01);与氨节青霉素相比，湘蕾95%醇提物抑菌效果不及它。

由表2.6可知，湘蕾超渣95%提取物对5种细菌也有不同程度的抑菌效果，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现为高敏，对福氏痢疾杆菌、肺炎双球菌和链球菌表现为中敏。与灰毡毛和济银花比较，湘蕾对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌和肺炎双球菌的作用效果稍强于灰毡毛，比济银花显著((P<0.01)，而对大肠杆菌和链球菌的抑菌效果，湘蕾稍弱于灰毡毛，同样比济银花显著(P<0.01)。与湘蕾未经超临界萃取的95%醇提物相比，湘蕾95%醇提物比超渣95%醇提物抑菌效果显著(P<0.01)0

综合上述结果，同时发现在不同溶剂提物物中，以70%醇提物的抑菌效果为最佳，抑菌直径最大的到26.1 mm，相当于25 mg/mL的氨节青霉素(P<0.05);水提物的抑菌效果次之，它对这5种细菌也表现出极敏或高敏;95%醇提物的抑菌效果居尾。同时，还发现水煎渣再醇提，有抑菌效果，但比直接醇提物抑菌效果差。

2.1.2金银花鲜样和干样70%醇提物抑菌效果的比较

试验结果表明70%醇提物的抑菌效果最好，为此，本试验进一步以70%乙醇作为提取溶剂，比较金银花鲜样、冻干样和晒干样70%醇提物的抑菌效果，结果见表2.7。从表可得知，金银花鲜样、冻干样和晒干样70%醇提物对5种细菌均表现不同程度的抑菌效果，其中湘蕾鲜样提取物(2g鲜药/mL)对5种细菌的抑菌效果表现为高敏，湘蕾冻干样提取物(2g干药/mL)对5种细菌均表现极敏，最大的达27.5mm;晒干样提取物(2g干药//mL)对5种细菌均表现极敏。在相同细菌和浓度的条件下，湘蕾冻干样提取物的抑菌效果湘蕾比晒干样显著((P>0.05):从抑菌直径上看，湘蕾鲜样比冻干样和晒干样小，但湘蕾鲜样的实际浓度不到冻干样和晒干样四分之一，依这个数值计算，鲜样提取物的抑菌直径远超过同浓度的晒干样和冻干样。与灰毡毛和济银花比较，在相同条件下，湘蕾与灰毡毛的抑菌效果相当(P<0.05)，而比济银花显著(P<0.01)。与氨节青霉素(25mg/mL)相比，湘蕾冻干样和晒干样强于或相当于它((P<0.05);鲜样提取物抑菌效果稍弱于它。

4小结

实验结果表明:

①3种溶剂提取物中，以70%醇提物抑菌作用最强;

②鲜样和干样金银花中，以鲜样的抑菌效果最好，利用冷冻干燥技术生产金银花药材是今后发展方向;

③3种不同品种，以湘蕾金银花和灰毡毛忍冬抑菌效果最佳，

④金银花超渣提取物具一定的抑菌作用，这为金银花综合应用提供理论依据。

⑤GC-MS 分析结果表明，湘蕾一号金银花花蕾挥发油中被分离鉴定出70个化合物占挥发油总量的96.01%湘 蕾 一 号 金 银 花 花 蕾 含 有 芳 樟 醇香叶醇，松油醇等有效成分分别占全油的28.86%,、2.92%和6.01%其中主要有效成分芳樟醇的百分含量最高为28.86%。

据文献报道金银花忍冬.RB6S"挥发油中有效成分为芳樟醇香叶醇， 松油醇 。其中主要有效成分为芳樟醇。芳樟醇的含量为19.96% 。而湘蕾一号金银花花蕾挥发油中均含有芳樟醇，香叶醇，松油醇，等有效成分且均高于金银花忍冬中的含量$特别是主要有效成分芳樟醇的含量高达28.85%远远高于金银花忍冬中的含量研究结果表明湘蕾一号金银花花蕾的质量优于金银花忍冬是值得

大力推广和应用的优良品种#

湘蕾与济银花有效含量对比试验

金银花为常用中药, 具有清热解毒之功效。近十几年来, 我省大面积载培金银花, 产量占全国总产量的 60% , 产品畅销国内外市场。我省在规模发展金银花生产的同时, 注重金银花优良品种的选育研究, 经过十几年的努力, 选育了湘蕾一号, 亦名太湖一号优良品种。该品种具有适应性强单株产量高, 株形优, 蕾期长, 花蕾粗, 棒状, 色泽优, 气香浓,种植效益好等优良的农艺性状和商品性状。金银花新品种湘蕾一号与历史上金银花道地产区的商品济银花、密银花以及本地广泛种植的常规品种的农艺性状和商品外形质量的比较研究已做了大量的工作, 但有效成分的比较研究尚未开展。为了更科学地评价湘蕾一号0的内在质量, 充分发挥和利用湘蕾一号的优良性状, 笔者对湘蕾一号和济银花、密银花及本地广泛种植的常规品种的有效成分绿原酸含量作了较为深入的比较研究, 现报道如下。

1 实验材料

1. 1 实验药材 济银花采自山东省临沂地区平邑县, 密银花采自河南省新密县, 本地常规品种采自湖南省隆回县小沙江镇,湘蕾一号采自湖南省溆浦县

1.2 仪器试剂 高效液相色谱仪: 美国 PE 公司生产的HPLC 仪, LC- 295 紫外检测器, 200 系列二元泵, 南京千谱公司HW 色谱工作站。绿原酸对照品: 美 国 Sigma- AldrichChemie GmlbH 公司提供, 其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 固定相: 大连江申公司, ODS 柱: 250 @4. 6mm,5u 填料; 流动相: 乙腈 - 0. 1% 磷酸 ( 20B80) ; 流速: 0. 8ml#min-1; 检测波长: 326nm; 进样量; 10ul; 柱温: 室温。

2. 2 线状关系的考察 精密称取减压干燥至恒重的绿原酸对照品。加 95% 的乙醇制成 0. 159mg#ml- 1的溶液, 精密吸取上述贮备液 1. 0ml、2. 0ml、4. 0ml、6. 0ml、8. 0ml、10. 0ml, 置于10ml 量瓶中用 95% 乙醇稀释至刻度, 摇匀。取上述对照品稀释溶液, 各进样 10ul, 按上述色谱条件测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 绿原酸量( ug) 为横坐标绘制标准曲线, 回归方程为: y= 6990+ 1984557X, r= 0. 9997。表明绿原酸在0. 0159~ 0. 159ug 具有良好的线性关系。

2. 3 稳定性试验 以济银花样品溶液, 在 0、1、2、4、8、10h 分别进样 10ul, 记录峰面积积分值, 结果见表 1, 其 RSD 值为0. 141% 。可见供试品溶液在 10h 内稳定。

2. 4 精密度试验 取对照品溶液, 进样 10ul, 重复进样 6 次,记录峰面积积分值, 结果峰面积积分值的RSD 为 0. 508% 。

2. 5 重复性试验 取济银花样品液 90ml, 平行 6 份样品, 按样品测定法测定, 结果绿原酸含量 1 号样品 1. 117mg, 2 号1. 116mg, 3 号 1. 108mg, 4 号 1. 105mg, 5 号 1. 125mg , 6 号1. 104mg。其 RSD 为 0. 74% , n= 6, 表明本法重复性较好。

2. 6 回收率试验 采用加样回收法, 取已知含量的金银花粉末样品约 0. 18g( 含量为 3. 4857mg#g- 1, 精密称定 5 份, 每份分别加入对照品( 0. 159mg#ml- 1) 10ml, 按供试品溶液制备项操作, 各进样 10ul记录色谱图, 计算回收率( 结果见表 2)。

2. 7 样品测定 供试品溶液的制备: 精密称取不同品种的金银花粉末药材 1g, 置 50ml 圆底烧瓶中, 加 10 倍量 95% 乙醇进行回流提取, 置滤液溶于滤纸上于紫外灯下观察不显荧光为止, 趁热过滤, 弃去滤渣, 放冷, 再经 0. 45um 的微孔滤膜滤过, 置 50ml 容量瓶中, 加 95% 乙醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。对照品溶液的制备: 精密称取减压干燥至恒重的绿原酸对照品, 加 95% 乙醇制成 0. 159mg#ml- 1的对照品溶液。测定结果: 分别精密吸取对照品、样品溶液各 10ul, 注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件测定, 记录色谱图, 以外标法计算样品中绿原酸的含量。密银花 2. 46 ±0. 20; 济银花 2. 20±0. 22; 湘蕾一号 2. 69±0. 16; 本地常规品种 4. 00±0. 45。

3 讨 论

绿原酸含量高低是金银花内在质量的标志, 与临床疗效密切相关, 直接影响着临床疗效。湘蕾一号中有效成分绿原酸的含量比历史上金银花道地产区山东省的济银花高出0. 49% , 为济银花含量的 1. 22 倍; 比河南省的密银花高出0. 23% , 为密银花含量的 1. 09 倍。湘蕾一号的有效成分绿原酸含量高于金银花历史上的传统产区山东省的济银花和河南省的密银花, 其药用价值和临床疗效高于济银花和密银花, 尽管/湘蕾一号中有效成分绿原酸的含量比本地常规品种含量低, 但与本地常规品种相比, 湘蕾一号所具有的株形优、产量高、蕾期长、花蕾大、色泽好、香气浓郁等许多优良的农艺性状和商品性状是本地常规品种无可比拟的。

金银花比较结论-最简单版本