慢病毒载体介导IL-24基因转导人骨髓间充质干细胞的实验研究

作者：祁秋干;周清华;李印;李伟强;陈霏;秦建军

作者机构：300052天津,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总医院;450005郑州,郑州大学附属肿瘤医院胸外科;300052天津,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总医院;450005郑州,郑州大学附属肿瘤医院胸外科;510080广州,中山大学干细胞与组织工程中心;510080广州,中山大学干细胞与组织工程中心;450005郑州,郑州大学附属肿瘤医院胸外科

来源：中国肺癌杂志

ISSN：1009-3419

年：2013

卷：016

期：001

页码：7-11

页数：5

中图分类：R734.2

正文语种：chi

关键词：人骨髓间充质干细胞;IL-24;EGFP;基因转导;慢病毒载体

摘要：背景与目的 以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道.应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒载体,探讨其对hBMSCs的转导情况,为今后肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 应用DNA重组技术构建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒表达载体,并与慢病毒包装系统(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞,收集上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度.取重组慢病毒感染hBMSCs,通过嘌呤霉素筛选并纯化hBMSCs,应用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分别检测hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的表达情况.结果 成功构建了共表达IL-24和EGFP基因的重组慢病毒载体,经包装、纯化及浓缩,病毒滴度为7.25× 107 PFU/mL.重组慢病毒转导hBMSCs后,通过筛选获得纯化,转导效率可达到100％.qPCR检测示:转导组IL-24 mRNA表达明显高于未转导组(P＜0.05)；ELISA法检测显示转导组hBMSCs上清液IL-24蛋白表达40 μg/L,未转导组为阴性.结论 构建的携带IL-24基因的重组慢病毒载体可有效转导hBMSCs,表达IL-24蛋白.

慢病毒载体介导IL-24基因转导人骨髓间充质干细胞的实验研究