动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测

高效液相色谱法

1 范围

本标准适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测。

2 测定方法

2.1 方法提要或原理

用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。以磷酸—乙腈为流动相。用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。

2.2 试剂和材料

2.2.1 5mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液14mL，加水稀释至50mL。

2.2.2 0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6 mL，加水稀释至100 mL。

2.2.3 0.05mol/L磷酸—三乙胺溶液：取浓磷酸3.4 mL，用水稀释至1000 mL。用三乙胺调节pH值至2.4（以配4L溶液为例，取浓磷酸3.4 mL×4=13.6 mL，加水使成4000 mL，用三乙胺调pH值至2.4）。

2.2.4 磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

2.2.5 磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，pH值为4.0~5.0。

2.2.6 标准储备液：分别取达氟沙星对照品约10mg,恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约50mg,精密称定，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL(达氟沙星)和1 mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星）的标准工作液。置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为1周。

2.2.7 对照品溶液稀释步骤

（1） 对照品储备液浓度：1 mg/mL

（2） 最大残留限量（100μg/kg→100ng/g）

上机浓度为0.05μg/kg：

1 mg/mL×1mL

50 →20μg/mL

20μg/mL ×0.5mL

200 →0.05μg/kg（此浓度对应最大残留限量浓度，因为20mL提取液只有5mL上柱）

（3） 阳性添加（100μg/kg→100ng/g 样品/2g→200ng/2g）

20μg/mL×0.5mL

10mL →1μg/mL

1μg/mL×0.2mL →200ng

注：甲磺酸达氟沙星（C19H20FN3O3▪CH4O3S）： C19H20FN3O3 = 357.39 =78.81%

C19H20FN3O3▪CH4O3S 453.49

盐酸环丙沙星（C17H18FN3O3▪Hcl）： C17H18FN3O3 = 331.35 = 90.09%

C17H18FN3O3▪Hcl 367.81

2.3 测定步骤

2.3.1 试料的制备

绞碎后的供试样品、空白样品、空白添加试料样品

2.3.2 提取

取（2±0.05g）试料，置50mL离心管中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，10000r/min匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌肉、脂肪10000r/min5min；肝、肾15000r/min10min），取上清液，待用。用磷酸盐缓冲溶液10.0mL洗刀头及匀浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5min,离心（肌肉、脂肪10000r/min5min；肝、肾15000r/min10min）。合并两次上清液，混匀，备用。

2.3.3 净化

固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过柱，用水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。

2.3.4 色谱条件

流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液—乙腈（82+18，v/v），使用前经微孔滤膜过滤;

流速：0.8mL/min；

检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；

进样量:20μL

3测定方法灵敏度、准确度、精密度

3.1 灵敏度

达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星在鸡和猪的肌肉、脂肪、肝脏及肾脏组织中的检测限为20μg/kg，最大残留限量为100μg/kg。

3.2 准确度

本方法在20μg/kg~500μg/kg添加浓度的回收率为60%~100%。

3.3 精密度

本方法的批内变异系数≤15%，批间变异系数≤20%。

动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法