毛细管电泳仪的使用(原创)*电泳仪的使用方法

毛细管, 电泳仪, 原创

概要：准备工作1.毛细管的制备：①剪略长于需要长度的毛细管(使用专用的裁剪纱布)，断端利用镊子小心移除。②烧窗：从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗，窗口尽量小，过程中可用防护工具对窗口两端.

准备工作

1.毛细管的制备：

①剪略长于需要长度的毛细管(使用专用的裁剪纱布)。

断端利用镊子小心移除。

②烧窗：从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗，窗口尽量小，过程中可用防护工具对窗口两端的毛细管进行防护。

烧好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。

注：检测的有效长度为从毛细管进液端到检测窗之间的距离，这个距离一般根据实验者的需要自己掌握。

③取出卡槽：打开安放卡槽区域的门。

旋转固定卡槽的杠杆90度，按卡槽中央的释放按钮，握住卡槽的两端向上抽出卡槽。

④安装毛细管：将进液端的毛细管小心的从卡槽的出口插入。

进入时可轻轻旋转。当窗口到达检测点时停止插入，将游离的进液端毛细管从卡槽的入口引出。

并固定好毛细管外端的橡胶管。

注：插入毛细管时小心操作，窗口位置的毛细管非常容易破裂，需格外谨慎。

过程中切忌使用暴力。

⑤安放卡槽：用与取出的步骤相反顺序的操作安放卡槽。

2.添加样品，缓冲液及冲洗液：

①为了减少样品及缓冲液的挥发。

在插入加液管前可在加样管固定器的小孔内加入少量的ddH2O。

②已添加好的加液管，在插入转盘上的固定槽前先离心2min加液时注意加样枪头紧贴管壁，防止气泡的产生。

③为了减少虹吸作用，需要保持入口处和出口处的running buffer量一致，对于500ul体积的加液管，推荐加入500ul的剂量；对1.5ml体积的加液管，推荐1.3ml的剂量。

④推荐加入样品的最小剂量为50ul检测需要的最小剂量为15ul。

⑤在出口处的waste管中加入50ul的ddH2O，可以防止检测端的毛细管被冲洗液的残留污染。

电泳仪的操作

1.插上电源。

检查电泳仪的连接情况。

检查制冷区小槽内水量是否充足，打开电脑，打开电泳仪的开关(两扇门都需要关闭)。

在电脑桌面点开BioFocus的图标。

进入到BioFocus的控制界面。

2.设置程序：

①点击Reagents键，在已有的Reagents Data base中查看是否含有需要使用的配液，有可点击该配液查看。

或使用edit键进行修改；没有则点击add进行编辑添加。添加之后注意命名名称的唯一性。

②点击Cartridges键，对卡槽的相关参数进行查看，修改。如Cartridges Data base中没有和试验要求匹配的配置参数则点击Add进行添加。注意需要激活相应的或者设置的卡槽。

③点击Configurations→Define：添加需要的信息：configuration ID；Configuration description；select the cartridge→Continue：Regent双击左下角regent data base中需要选择的regent；双击屏幕右边你需要放置该regent的Inlet Carousel Position→Sample：命名。

同样的方式从左下角的Reagents中添加到右侧相应的位置上→点击empty然后点击需要删除的Regent；点击clear清除所有设置的Regent摆放次序→OK。

注：在以上几步中，记得同时设置好中止的清洗程序，及Shutdown程序。

ddH2O清洗5分钟。

氮气吹干。

④点击Methods：选择设置好的程序→Define：填写Method ID Description→Inlet Regent。

选择电泳中需要的Running buffer→Outlet Regent选择电泳中需要的Running buffer→Voltage Mode填写需要的电压，电流，正负极。

设定电泳时毛细管需要的温度，以及电泳时间→Add：添加在电泳前后需要灌注的洗液等。

填写灌注的时间→Injection：选择电压或者气压的进液方式；前者需选择恒压或者恒流。

以及进液时间的长短；后者需选择压力*时间的进液常数→Detector：Detector Parameters：设置波长。

时间。

通道，AU范围；Display parameters：设置波长。

AU范围。

偏移；Options：设置Rise Time Turn off lamp at run end；Designation：该设者存储的位置→OK

⑤点击Auto Seqs：选择需要的程序→Define查看。

编辑需要调整的程序。

如States显示Conflict则需要对相应的设置进行调整。

知道状态显示Pending→Pending。

Ready→OK→Start

停止，存储，查看文件

①等待所有的程序完成后(包括运行程序及情节程序)。

要停止运行的程序。

则可点击屏幕左上角的Stop键→选择需要中止运行的某一步(Abort Current Run Only)，某一组(Abort Current Run Group)或所有编辑的程序(Abort Automation Sequence)→OK→存储在指定盘上(Yes)，自定义盘(NO)→需要取出加液管及转盘(YES)不需要(NO)

注：在所有的对话框消失之前。

以及转盘没有回到初始位置之前，不能打开电泳仪的门。

操作要点：

1.将毛细管电泳仪放置于有空调的房间。

保持室温恒定。同时。

操作中控制毛细管及仪器恒温。

2.缓冲液加压一段时间后。

淌度和电渗流会变化，要经常更换。

3.缓冲液要用0.45mm微孔滤膜过滤后使用。

4.对未涂渍的毛细管柱每天使用前先用0.1mol/L氢氧化钠溶液、水及运行缓冲液各冲洗10min平衡后使用。更换缓冲液时。

要用水冲洗3min后，再用缓冲液冲洗10min平衡后进样。

5.样品宜溶于稀释5~10倍的运行缓冲液中。

以获得好的峰形。

6.为提高定量准确性。

宜加入一内标。在保证峰形的前提下。

样品宜用高浓度，进样时间应大于5psi sec。

7.摸索实验条件时。

可先用一短柱，用磷酸盐、硼砂或Tris在不同的pH值条件下试验。

当选定缓冲液种类时，可先改变pH值获得最佳分离。

再改变浓度以获得较好的峰形及柱效。为使分析高效、快速，电压一般可用18~20kv。

8.每次作完实验后，用水冲洗5min，可将毛细管两端置于水中保存。

也可用氮气吹干后保存。

毛细管电泳仪的保养

卡槽的清洁

松开固定卡槽前方Holder的螺丝，用羊毛刷及ddH2O清洁卡槽。

然后用干净的刷子将其擦干。

如果可以的话。

可以用异丙醇，甲醇或者乙醇代替水进行清洁，这样保存的时间较长。

压力电极的清洁

吸入端电极的清理非常重要，利用甲醇，异丙醇，或者乙醇清洁内部及其顶端。在电极内部小孔的顶部涂上一层薄薄的润滑油进行有效的防护。压力电极底部边缘的两个小孔需要用羊毛刷和水每个月进行清洁。

毛细管卡槽的清洁

每次电泳完毕之后。

应该将毛细管用清洗液。

ddH2O冲洗。

然后用氮气吹干。

托盘的清洁

托盘内的小槽可能由于电泳液的溢出而收到污染，应采用温水以及性能较为温和的去污剂浸泡。

然后用ddH2O冲洗干净。

晾干，然后再安装好。清洗过程中注意不要让安放EP管的小槽划出托盘，经常使用的小槽应重点清理。

制冷器的更换及灌注

在常规的使用中。

制冷储备槽应当经常检查和补充水量。水量应控制在槽内壁两条线之间，每周加入1到2毫升的甲醇以防止细菌的滋长。使用电压在20KV以下时，ddH2O可以作为制冷液，在20~25KV时。

大部份的情况下仍然可以采用水作为制冷液，在≧ 25KV时就要采用Fluorinert FC 77Bio-Rad catalog#148-6050(机器配置时自带一瓶)

清洁制冷槽的步骤：

1.用螺丝启讲制冷槽holder松开从底部取出槽.

2.用制冷清洁压力器尽可能的取尽其中的液体用羊毛刷刷净槽内.

3.托盘内的卡槽归位管好门.

压缩机托盘的清洁

在电泳仪设备的底部有一个托盘。

它收集来自制冷器的废液，每周应检查是否已满。

尤其是潮湿的情况下需进行检查。

如果内部有水，用容器在下部接住，并按下托盘右边的按钮。

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