精测唾液淀粉酶的最适PH实验设计

摘要：目的掌握精测唾液淀粉酶最适pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722分光光度计的使用。步骤首先配置缓冲溶液，然后获取唾液，稀释唾液，唾液稀释倍数的选取

，淀粉的分解，吸光度的测量，最后记录数据，作图。结果测得pH值在6.0～8.0范围内并且随着pH的增大先减小后增大，pH＝6.8左右，吸光度值最低。分析pH＝6.8左右，酶的活性最大[1]，

淀粉被分解的最多，剩余底物的量最少，A值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。

实验原理：酶催化活性最高时，反应体系的pH值称为酶的最适pH值[2].碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色，即：淀粉（蓝色） 紫色糊精（紫色） 红色糊精（红色）

麦芽糖及少量葡萄糖（黄色）。[3] 利用朗伯－比尔定律[4],用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值

仪器材料和试剂药品：

仪器材料：1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、小烧杯、坐标纸、漱口水

2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴

3. 0.1ml、0.5 ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管

试剂药品：1. 0.02％淀粉溶液 2. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 3. 碘液、水

实验过程：

1 ) 缓冲液的配置：根据下表[5]，配置各个pH值的缓冲溶液各10ml

pH 值

6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0

磷酸氢二钠 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 81.0 87.0 91.5 94.7

磷酸二氢钠 87.7 81.5 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 19.0 13.0 8.5 5.3

2）唾液的获取：[6]

蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.

3）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09

管 号

00 01 02 03 04 05 06 07 08 09

唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

蒸馏水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0

4)唾液稀释倍数的选取

另取10支试管，分别编上00～09号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴箱中，

5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选

取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。

5)测量pH： 取12支试管，分别标上号1～12，按下表操作

管 号

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

0.02％淀粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

2ml缓冲溶液pH 6.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0

(保温10min) C 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37

稀释唾液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

充分混匀后继续水浴加热，从1号试管中每隔1min取一滴液体，滴入白瓷板中，再滴一滴碘液与之反应，观察颜色变化，当颜色变黄时，取出2～12号试管，然后沸水浴 15min ，使酶失活，

酶促反应停止。然后后取出各试管，冷却至室温，往各支试管滴加1～2滴碘液。用分光光度计测出2～12号试管中溶液的吸光度A值，做好记录。在坐标纸上作出平滑曲线，

取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值

参考文献：

[1][6] zhidao.baide.com

[2]查锡良、周春燕 . 生物化学 . －第7版－北京：人民卫生出版社2008.1：75

[3][4][5]张杰、李淑艳 . 医学化学实验技术 . －第1版－北京：北京大学医学出版社2006.12：276、235、345

精测唾液淀粉酶的最适PH实验设计