实验八 维生素B 12注射液检验（吸收系数法和标准曲线法）一、实验目的1、掌握维生素B 12注射液的紫外分光光度法鉴别及含量测定2、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。二、主要仪器与试药维生素B 12注射液、维生素B 12对照品紫外-可见分光光度仪、石英比色皿、10ml 容量瓶（4个）、5ml 吸量管三、实验准备1. 0.1mg/ml 维生素B 12贮备液：精密称取干燥至恒重的维生素B 1210mg ，置100ml 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。四、实验内容实验原理：维生素B 12分子结构中有共轭体系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。实验方法：精密量取本品适量，加水稀释至维生素B 12浓度约为25 μg/mL ，作为供试液，照分光光度法，在278nm ，361nm ，550nm 处测定吸光度。1. 鉴别：规定A 361/ A 278 应为1.70-1.88， A 361/ A 550应为3.15-3.45 。2. 含量测定吸收系数法：利用上述361nm 处测定得到的吸收度，按其吸收系数E 1％1cm =207 计算含量及标示量百分含量。标准曲线法：精密量取1.0、2.0、3.0、4.0ml 0.1mg/ml 维生素B 12贮备液，分别置于10ml 量瓶中，用水稀释至刻度。以溶剂为空白，在361nm 处分别测定吸收度（A ）。以浓度C 为横坐标，以吸收度A 为纵坐标绘制标准曲线。将样品在361nm 处测定得到的吸收度代入线性回归方程，计算，即得。五、计算公式本品为注射剂，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为： 按标准曲线法定量计算： ％稀释倍数标示量％标示量标示量实测100C 100C ×××==E A C

实验八 维生素B12注射液检验