临床检验技术发展及其在耐药基因检测中的应用进展

　　【摘 要】 现代的医疗技术得到了迅速的发展，在医学中临床治疗是极为重要的一部分，而一份准确且全面的医学检验报告对于医生做出准确而诊断、并且进一步制定出正确的治疗方案显得至关重要。近年来，临床检验技术得到了快速的发展，本文就是在这样的基础上对于临床检验技术在耐药基因检测中的应用进行了研究，希望对于临床治疗的发展提供一定的参考价值。

　　1 临床检验技术发展

　　在对于现代的疾病进行临床诊治的过程中，临床医学检验技术是帮助临床医师做出正确的诊断的一种重要的方法，技术水平的高低直接的决定了临床医师的诊断是否准确，影响了患者的生命安全。近年来，随着科学的发展、社会的进步，临床检验技术也得到了进一步的发展，最新的生物技术以及关于生物信息研究逐渐的进入到临床实验室中。

　　1.1 自动化检测的普及

　　目前，对于临床检验的技术操作中，自动化的程度变得越来越高。在传统的临床检验中，往往是临床医师采用手动检测的方式，这样在不同的条件下受到的影响就不一样，而不同的医师做出的诊断很容易受到医师自身的主观性的影响，进而得出的临床检验结果存在误差的可能性就大大增加了。而随着自动化的普及，现在的临床检验大部分都转变成了全自动化的设备，这样不但能够排除不同的医师由于主观性做出的判断存在的误差的影响，而且还能够检测出多种生化、免疫的指标，以及检测出与疾病相关的基因。临床检验设备自动化普及，不但加快了临床发展的速度，而且提高了检测结果的准确率以及精确度，并且同时节省了人力资源。

　　1.2 免疫标记技术

　　在20世纪中期，分子生物学渐渐地拉开了序幕，研究人员首先发现了DNA的双链结构，以及限制性的核算内切酶的应用，后来对于DNA的测序技术也逐渐变得成熟，分子生物学逐渐的成为了临床诊断过程中不可缺少的一部分。随着这些生物学技术的发展，免疫标记技术、荧光技术等逐渐的融入到临床检验的技术之中。

　　2 临床检验技术在耐药基因中应用

　　由于生物学技术在临床检验技术中的高度应用，以及生物学技术本身的一些特性，使得临床检验技术在耐药基因的检测中能够得到一定程度的应用。

　　2.1 核酸杂交

　　核酸杂交，在分子遗传学中是一种较为基础的研究工具，在临床检验技术中也得到了应用。这种方式的原理就是利用分子之间能够形成双链分子的能力（即可以相互杂交）。能够形成双链分子的单链分子的碱基对之间必须有着极为高度的配对，才能够进行互相杂交。在一般情况下，就是将一段核酸分子标记之后，将其作为探针，与许多还没有进行标记的核酸分子混合到一起，使用标记来对同源的DNA分子和RNA分子做出鉴定。一般情况下就是把细菌菌落直接的转移到滤膜上，使其进行杂交，可以使用同位素作为标记用于对耐药基因做出定位。然后将从细菌中抽取出的质粒通过琼脂凝胶电泳、转膜之后，使用特异性耐药基因探针进行杂交，通过对于电泳图上的质粒的位置的观察，以及是否存在标记的信号的判断，就能够确定该药物的耐药基因是否是在质粒上定位的。

　　2.2 聚合酶链反应

　　聚合酶链反应，即PCR，是一种在体外的、快速的从某种来源的魔板DNA中对目标DNA进行扩增的方法，在分子生物学中是一种最常见的技术。这种技术可以用于对细菌核酸内已经知道的耐药性基因进行筛查以及验证。通常情况下，使用商品试剂盒从细菌中基因组、质粒进行抽提，得到的纯度和浓度都是较高的，因此可以将其作为DNA的比较稳定的模板。通过对菌落煮沸裂解进行挑取从而直接的得到细菌 DNA 的模板，十分的方便、快速，在对于耐药基因进行大规模的筛查时有着很适合的应用。

　　2.3 全基因组测序

　　目前，随着生物学技术的快速发展，近年来对于基因组的测序工作也得到了飞速的发展，想要获得一个五中的全基因组序列已经不是十分的困难，尤其对于一些比较简单的细菌基因组来说，获得其全基因组序列较为容易。在对于耐药株的核酸全序列有了一定的了解的前提下，可以在基因组的水平上对于基因的分布、代谢的途径、调控的通路等上面有着一个全局性的认识，尤其是对于耐药基因是如何进化的以及如何出传播的有着更加明确地了解，从而对目前存在的细菌耐药问题有着更深层次的了解。传统的方法往往是：首先对全组基因组的DNA文库进行构建，然后使用载体克隆的大量文库DNA片段对毛细管进行电泳测序，再讲这些测序的片段拼接起来，从而获得完整的基因组。近些年来，基于芯片技术的一种对全基因组进行测序的技术逐渐的兴起，且取得了实验的成功并将得到应用。

　　随着分子生物学技术的不断发展，其在耐药基因的检测中的应用必将变得更加的广泛，由于它能够揭示出细菌耐药性的产生原因、以及流行的分子机制，故而对于控制耐药细菌的流行将会起到重要的作用。

　　3 结论

　　近年来，临床检验技术得到了飞速的发展，其中电子自动化设备的应用、以及分子生物学在临床检验中的应用变得越来越广泛，也正是由于这些因素，使得临床检验技术在耐药基因的检测中得到了进一步的应用。新的检测方法能够示出细菌耐药性的产生原因、以及流行的分子机制，从根本上控制耐药细菌的扩展，对于医学发展有着重要的意义。

　　参考文献

　　[1] 许敏.美国临床检验医学进展的借鉴[ J] .首都医科大学学报， 2007 ， 28 （2）：182-184.

　　[2] Cat toi r V ， Poi rel L ， Rotimi V ， et al.Mu ltiplex PCR f or detect ion of plasmid-mediat ed quinolone resis tance qn r genes in ESBL-producing ent erb acterial i solates [ J] . J Ant imicrob Chemother ， 2005 ， 49 ：3091-3094.

　　[3] 俞去松.分子生物学技术在细菌耐药性研究中的应用[ J] .中华检验医学杂志， 2008 ， 31 （6）：610-613.

　　[4] H ata M ， suzu ki M ， Mat sumot o M ， et a l.C loning of a novel gene for quinolone resi stance f rom a t ran sferable plasmid in shigella f lexneri2b [ J] .Ant imicrob Agent s Chemother ， 2005 ， 49 ：801-803.

　　作者简介：李俊，女，汉族，1957年11月，河南巩义人，巩义市人民医院主管检验师，临床检验专业，大专学历。

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