高效液相色谱法含量测定

1检验方法

高效液相色谱法

2检验原理

高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。

3检验试剂

甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。

4供试品溶液制备

取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。

5对照品溶液制备

根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。

6流动相配制

用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。配制好的流动相通过适宜的0.45nm的滤膜滤过，用前脱气。

7操作

7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。

7.2自动进样器排气

自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。

7.3泵排气

分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。

7.4进样操作

7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。

7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。

7.4.4设置批处理分析表。分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。

7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。

7.5色谱数据的收集处理

7.5.1 建立标准曲线

7.5.1.1再解析界面中，选择要处理的对照品数据的其中一个数据，点击向导，出现化合物表向导，选择最小面积，点击下一步，选择有效峰，点击下一步，输入浓度单位，最大级别数，点击下一步，输入化合物名，依次输入几个对照品溶液浓度，点击完成。保存方法文件。

7.5.1.2在方法中，打开上述所保存的方法文件，出现校准曲线视图，将相应浓度的对照品色谱数据拖至数据文件相应的级别中，形成标准曲线图，查看R数值不大于0.9999，表明线

性关系良好，方法文件另存为标准曲线。

7.5.2收集处理供试品溶液色谱数据

7.5.2.1打开供试品溶液其中一针的色谱图，用上述建立的标准曲线加载方法参数，计算出此针供试品的含量。

7.5.2.2依次计算其余几针供试品溶液的含量。

7.5.2.3同一浓度供试品溶液连续进样5针以上，相对标准偏差应不大于2%，表明样品稳定性及重复性良好。

7.5.2.4收集上述供试品含量，计算平均含量，得出此供试品的含量。

8清洗和关机

8.1分析和再解析完毕后，用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，直至基线平直。

8.2用10%甲醇冲洗泵头。

8.3退出工作站，关闭自动进样器、检测器、泵、柱温箱。

9注意事项

9.1色谱柱连接要依照箭头指示的上下方向，两端口要拧紧。

9.2使用的流动相应与仪器系统原保存的溶剂互溶，如不能互溶，先用异丙醇进行过渡。

9.3进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡。

9.4工作期间，保持环境安静，温度恒定，减少外界干扰。

高效液相色谱法含量测定操作规程