实时荧光定量PCR鉴别食品中猪源性成分的研究进展

［摘 要］本文针对目前鉴别食品中猪源性成分的方法，即实时荧光定量PCR技术进行综述，并展望其应用前景。

［关键词］荧光定量PCR；猪源性成分；鉴别

1 猪源性成分检测的传统方法

过去用于肉食中物种的鉴定主要依赖于电泳法，免疫法，ELISA等蛋白质分析法。这些技术对于加工混合肉制品却无法分析出，而PCR技术基于其反应时间短，具有较高灵敏性、特异性成为鉴别加工食品中物种的优先选择。但传统的PCR技术在定量和大批量检测中局限性较大。因此，急于发现一种新的技术可以精确地辨别物种并实现快速、大容量的实时定量检测，而新兴的实时荧光定量PCR技术可以很好的满足要求，正广泛的应用于食品中猪源性成分的检测。

2 实时荧光定量PCR技术

实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR）, 即在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

Real-time Quantitative PCR中使用的荧光化学主要有两类：荧光染料和荧光探针。荧光探针扩增特异性要好于荧光染料法，其中Taqman探针是应用较广的一类。

3 实时荧光定量PCR鉴别猪源性成分的应用

国外应用该技术进行猪源性成分的检测已有大量相关文章报道。Rodriguez等人设计出扩增哺乳动物线粒体12SrRNA的一段基因序列的猪特异Taqman探针，该探针可检测出猪牛混合肉中的猪源性成分和目标基因的扩增情况，并准确定量出猪牛混合肉中的猪肉含量，该方法的定量范围为0.5%~5% 。Dooley等人也利用动物线粒体Cytb基因的一段区域设计出了Taqman探针，用于特异性实时扩增猪、牛、羊、鸡和火鸡五种动物。尽管是从混合肉糜中提取DNA进行扩增，但该方法依然特异性良好，并且各种动物的检测定量限均可达0.5%。利用Real-time Quantitative PCR和Taqman探针,Laube等人，不仅扩展出了牛、猪、山羊、绵羊、鸡和火鸡的特异性片段，还可检测出食品（包括罐头）中特定物种的掺入量，检测限可达0.1% 。同时研究者还引入了内参照基因，可以很好的监测反应是否正常进行从而避免了结果判断中的假阴性现象。

在我国，目前也已颁布了相关的检测标准——《GB/T21103-2007动物源性饲料中哺乳动物源性成分的检测方法实时荧光定量PCR方法》，该方法也可用于食品中的猪源性成分的检测，并且国内也有相应的检测试剂盒出售，将标准化的荧光定量PCR检测技术成功地用于日常检测工作中。简化了传统PCR方法，使用最少的样本量，同时可监测96孔样品的扩增情况，在一小时左右出结果，减少样本消耗殆尽风险，缩短了出报告时间， 实现了检测机构快速、准确、大批量的检测目标。

4 展 望

食品中猪源性的鉴别方法经历了蛋白质分析，酶联免疫法，DNA分子杂交，常规PCR等不同阶段发展到实时荧光定量PCR技术。以其快速、灵敏、特异成为鉴别猪源性成分的一种重要方法，还在转基因食品、致敏食品和食品污染的检测中发挥着作用。以后还将不断出现以荧光定量PCR技术为基础的更快速，简便的物种鉴别新方法，使食品的安全性大大提高，更好的保障消费者的利益。

参考文献:

［1］ Sinclair, A. J.& Slattery, W. J. Identification of Meat According to Species by Isoelectric Focusing.Australian Veterinary Journal, 58, 79-80 (1982).

［2］ King, N. L. & Kurth, L. J. Analysis of Raw Beef Samples for Adulterant Meat species by Enzyme-staining ofIsoelectric Focusing Gels. Journal of Food Science, 47, 1608-1612 (1982).

实时荧光定量PCR鉴别食品中猪源性成分的研究进展