723N分光光度计使用细则

曲新鹤

（哈尔滨工程大学）

摘 要 本文以723N分光光度计为载体，简要介绍了一些分光光度计的使用问题，包括测量物质颜色、浓度、成分等要求；调“0”“100”操作；波长扫描作用、操作；定量分析等。

关键词 723N分光光度计 调“0”“100” 空白液 波长扫描 基线校正

分光光度计是现代化分析实验室必备的常规仪器之一，适用于化学工业、冶金工业、食品工业、制药工业、临床分析化验、环境保护等部门对各种物质的定性定量分析。723N分光光度计使用YOKE3.0专业分析软件，可实现标准曲线建立、动力学测试等功能，有丰富的测量方法，具有波长扫描、时间扫描、多波长测定、多阶导数测定（选）、双波长、三波长等多种测量方法，可满足不同测量的要求。另外，723N分光光度计采用微机技术，自动调整“0”“100”，可直接消除比色皿配对误差。很多新增的功能，使723N分光光度计使用起来更方便，同时也给操作人员带来很多新的困难。下面简单讨论723N分光光度计的一些使用细则，以便操作人员使用。

1 被测量物质要求

1.1 浓度要求

由于吸收定律只适用于稀溶液，高浓度的溶液必须稀释后测量。溶液过浓会使吸光度过大，溶液过稀会使吸光度过小，测量均不准确。据有关资料报道，当所配溶液的吸光度为0.434（透射比为36.8%）时，获得的测量准确度最高，误差最小。不过在实际应用中，一般保证所配溶液吸光度在0.2-0.8范围内即可。

1.2 溶剂颜色要求

所测溶液应是有色溶液，如溶液本身没有颜色，应加入显色剂后测量。因为光照到无色溶液上时，除小部分从物体表面反射外，绝大部分将透过穿射物体，使吸光度接近于零。比如测量空气中碘的吸光度，需在吸收液中中加入淀粉，使之显色。

1.3 有机溶剂要求

对于某些有机化合物，像分子中存在烯醇（）结构的化合物常会发生互变异构现象，生成酮式异构体和醇式异构体。有的由于分子中碳碳双键（）的存在，而产生顺式异构体和反式异构体。有的又因碳链结构不同，而出现同分异构体等。由于这些化合物结构不同，因而表现出吸光度的差异。另外，由于某些溶质分子中由于存在某些极性基团或原子，如氢、羟基等，从而常会出现缔合现象，形成氢键或类似二聚体或多聚体的结构，会引起吸收峰的偏移或吸收曲线形状的改变，使测量结果不准确。

2 调“0”“100”

2.1 调“0”“100”的定义

723型分光光度计具有自动调“0”“100”的功能。调“0”即揭开比色皿暗箱盖（切断光路）时，使吸光度为0；调“100”即合上比色皿暗箱盖（闭合光路）时，使透射比为100%。

2.2 空白液的选择

调“0”“100”应对空白溶液进行，按下“调零/调满度”键即可。空白液即测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。空白液可按以下规则选择:

A 当试剂及显色剂本身均无色时，可用蒸馏水作参比溶液。

B 显色剂为无色，而被测试液中存在其它有色离子，可用不加显色剂的被测试液作为参比溶液。

C 显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。

D 显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其它试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。

E 如果改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以把此溶液作为参比溶液消除干扰。

2.3 消除比色皿配对误差

在做比色分析时,各种分析仪器都要求有配对良好的比色皿,国家检定规程中规定比色皿间的偏差不得超过0.5%。对于723N分光光度计，在调“0”“100”的同时具有自动消除比色皿配对误差的功能，故调“0”“100”后不应再调换比色皿在比色皿架上位置。

3 波长扫描

3.1 波长扫描的功能

针对单物质样品，通过对其进行波长扫描，得出吸收图谱，与标准物质进行比对，可确定物质的性质或种类，即定性分析。

对于已知样品，波长扫描可找出样品的最大吸收峰，在最大吸收峰处可进行定量分析。

3.2 基线校正

在波长扫描模式下有一个选项为基线校正，它的的功能也是进行调零。光度计模式下的调零是对一特定波长而言，而基线校正是对全波长上的各个点进行调零。值得注意的是，基线校正只能在R档进行。虽然只在R档进行了基线校正，但相当于对S1、S2、S3都进行了调零，因为他们都是以R档为参考的。

3.3 具体操作

波长扫描的具体操作为，首先进入波长扫描模式，用空白液对R档进行基线校正，然后换上待测液进行波长扫描。对于未知样品需进行全波长扫描，得扫描图谱，与标准物质对照，可得测量物质的种类或性质。对于已知样品，可进行全波长扫描，也可进行分波段扫描，得出最大吸收峰。

3.4 注意事项

如果误对S1、S2、S3中任意档进行了基线校正，就会造成系统混乱，使测量出现错误，此时需在仪器操作模式下，对系统进行内存清除，然后重新扫描。另外，在基线校正的时候，屏幕右上角显示的吸光度可能不是“0.000”,这不是基线校正的最后结果。为检验基线校正的结果，可对空白液进行扫描，看结果是否为一条比较直的在零上的直线。如果波动较大，可重复进行基线校正，至结果稳定。

4 定量分析

4.1 吸收定律

定量分析用于测量未知溶液的浓度。

根据吸收定律 A=KCL

其中：A---吸光度

K---吸收系数

C---溶液的浓度

L---溶液的光径长度

由吸收定律可知，当入射光、吸收系数、和溶液的光径长度不变时，溶液的吸光度是和其浓度成正比的。所以可用已知浓度的溶液绘制标准曲线，然后用该曲线测量未知溶液浓度。

4.2 标准曲线的绘制

具体操作为，首先进入定量分析模式，设定波长为最大吸收波长，进行调零/调满度。然后建立标准曲线，有系数输入法、一点法、多点待定法。系数输入法需已知曲线，输入斜率K和截距B；一点法是建立过原点的曲线，需已知一标准溶液的浓度；多点待定多用于建立不过原点的曲线，需2-9份标准溶液，用线性回归的方法建立曲线。之后，放入未知浓度的溶液，选择“样品”选项可进入未知浓度溶液的测试。

总结

参考文献

刘劲杨 《分光光度计的使用与检定》 1993.11

朱明华《仪器分析》 2000.7

723分光光度计使用细则